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目的:BUC（Bladder urothelial carcinoma,膀胱尿路上皮癌）是膀胱癌的主要类型，约占膀胱癌的90％，是泌尿系统常见恶性肿瘤之一。近年来有报告显示BUC的发病率逐年增高，加上它复发率高，已经严重威胁我国居民健康，同时也带来巨额的医疗花费。现有的治疗手段，包括手术治疗及辅助放化疗等效果都十分有限，术后患者的高复发率和高进展（包括转移）率是膀胱癌诊断和治疗所面临的难题。寻找高敏感性、高特异性的早期诊断分子标记物和检测方法对于临床工作具有重要的指导意义。UHRF1是近年来发现的普遍在肿瘤中报道包括肺癌、肠癌、乳腺癌等与肿瘤恶变密切相关的一个作用强大的分子，具有促进增殖、调控细胞周期、DNA损伤修复、DNA甲基化等多样生物学功能。我们在前期工作中从形态病理学上验证了UHRF1与膀胱癌密切相关，并且细胞学功能实验中证实其调控肿瘤细胞的恶性增殖。本实验在原有的工作基础上对UHRF1的分子功能和作用机制进行深入的探讨。探索这些UHRF1对膀胱癌5637细胞和T24细胞的活性和增殖侵袭转移等相关功能和分子机制，为开发其应用价值奠定扎实的理论基础。 材料与方法: 一.细胞培养. 购置BUC BT5637细胞系和BUC T24细胞系（吉凯基因化学科技有限公司，上海），并以DMEM培养基培养。 二.qPCR实验检测 1.收集生长良好的膀胱癌5637细胞和T24细胞，用Trizol试剂提取总RNA。2.去基因组后，核酸蛋白检测仪上测定OD值，检测RNA质量。3.逆转录RNA获得cDNA。4、qPCR检测目标基因表达水平。5、数据分析。 三、转染 1、构建携带目标UHRF1干扰基因的慢病毒(pGCL-GFP)载体。2、阳性克隆的PCR鉴定。3、用293T细胞包装慢病毒形成慢病毒重组体，并用孔稀释法测定滴度。4、膀胱癌5637细胞和T24细胞中转染慢病毒重组体及转染效率测定。5、感染了UHRF1的RNAi慢病毒的膀胱癌细胞系5637进行qPCR和Westernblot实验检测。 四.MTT比色法分析细胞增殖 用MTT比色法对膀胱癌细胞5637处于对数生长期的实验组（空细胞对照组、转染阴性对照慢病毒细胞组、转染UHRF1的RNAi慢病毒细胞组）进行连续6天的细胞增殖情况分析。 结果: 1.qPCR实验检测结果显示:膀胱癌细胞5637和T24细胞中UHRF1的表达量均为高表达。 2.膀胱癌细胞5637和T24细胞试验中转染效率的直观图片和荧光图片结果显示:慢病毒对膀胱癌细胞5637和T24细胞达到了90％以上的感染效率。 3.UHRF1 RNAi慢病毒的膀胱癌细胞系5637的qPCR和Western blot实验检测结果显示:膀胱癌细胞系5637感染了UHRF1的RNAi慢病毒后，有效实现了对目的基因的表达抑制，通过qPCR和Western blot实验检测，UHRF1的mRNA水平和蛋白水平显著被抑制。 4.MTT比色法显示:转染阴性对照慢病毒细胞相比于对空细胞对照细胞增殖受到轻度抑制;而转染UHRF1的RNAi慢病毒细胞膀胱癌细胞5637试验组相比于染阴性对照慢病毒细胞组和空白对照细胞5637细胞增殖均受到抑制，其中前者更为明显。 结论: 1.qPCR验证结果显示在膀胱癌细胞5637和T24细胞中UHRF1与前期实验中组织表达结果是一致的。因此基于膀胱癌细胞5637和T24细胞中UHRF1的功能研究的体外实验可以为研究其在BUC中的作用提供重要参考。 2.本实验应用慢病毒作为目标基因UHRF1干扰的载体效果良好。 3.细胞增殖MTT法分析显示通过RNA干扰降低UHRF1的表达能引起膀胱癌细胞5637的增殖抑制。提示UHRF1可能在膀胱癌中起致癌作用。 4、本实验证实了UHRF1对膀胱癌细胞5637和T24细胞的影响，关于他们在尿路上皮癌中的具体作用机制还需要迸一步的实验研究。