近年来生防菌株在农业领域的应用备受关注。植物根际土壤是一个微生物种群极其丰富的环境,利用合适的筛选方法从中获得有良好拮抗活性的细菌有较高的研究价值。本论文首先从山西省晋中市榆次区某农田土壤采样,利用稀释涂布法分离得到53株细菌,使用改良牛津杯法进行拮抗细菌的筛选,得到3株拮抗细菌。经过滤膜法复筛发现菌体可以表现出拮抗活性,说明这些拮抗细菌的抑菌作用不需要微生物细胞之间的直接接触,而传统牛津杯法复筛发现拮抗细菌的无细胞发酵液没有表现出拮抗活性,可能因为拮抗细菌的无细胞发酵液中有效成分含量太低。同时,这些结果也说明,与传统牛津杯法和滤膜法相比,改良牛津杯法操作简单,效果更好。液体混合培养法复筛也验证了上述结果。对分离得到的拮抗细菌CK09进行生理生化特征鉴定和16S rRNA序列分析,结果表明,该细菌为辣椒溶杆菌(Lysobactercapsici)。基于改良牛津杯法的良好效果,我们对这种方法进行了进一步的优化。采用单因素实验对改良牛津杯方法中培养基琼脂浓度、拮抗细菌和指示细菌的活菌数等参数进行优化,最终发现,最佳琼脂浓度为10 g/L,最佳拮抗菌浓度为10~8 CFU/mL,而不同指示菌的最佳浓度有差异。利用优化的方法对辣椒溶杆菌CK09抑菌广谱性进行检测发现,辣椒溶杆菌CK09对6株常见的植物病原真菌和4株芽孢杆菌属的植物病原细菌均有良好的拮抗能力。以三种代表型微生物(Bacillus sp.CK06,革兰氏阳性细菌;Sphingomonas sp.CK02,革兰氏阴性细菌;Botryosphaeria dothidea SXYTLJ01,真菌)为研究对象,采用液体混合培养法探索辣椒溶杆菌CK09对指示菌的作用类型,以及高温、pH和辣椒溶杆菌CK09培养时间对抑菌物质的影响。结果发现,辣椒溶杆菌CK09对三种指示微生物均表现出很强的杀菌作用;温度、pH和培养时间对抑菌物质拮抗活性的影响随着指示菌的变化而各有不同:对Bacillus sp.CK06起作用的抑菌物质有很强的热耐受性和酸碱耐受性;对Sphingomonas sp.CK02起作用的抑菌物质会在120℃的高温下失去活性,同时其对酸和碱的耐受性也较差,需要在接近中性pH时才有活性;对B.dothidea SXYTLJ01起作用的抑菌物质热耐受性强,但酸碱耐受性较差;而且这些抑菌活性物质在辣椒溶杆菌CK09不同的培养时间抑菌活性也不同。表明辣椒溶杆菌CK09可以分泌多种抑菌活性物质。产酶和铁载体实验证明辣椒溶杆菌CK09可以产生蛋白酶、纤维素酶、几丁质酶和铁载体,这些水解酶类和小分子物质可能在其拮抗能力中扮演重要角色。上述研究为辣椒溶杆菌CK09的实际应用提供了理论支持,并且采用的筛选和研究方法——改良牛津杯法,操作便捷,效果良好,可以为拮抗菌的筛选研究提供一种全新的思路。