论文部分内容阅读
本课题是通过研究D-半乳糖诱导白内障大鼠晶状体上皮细胞内质网应激机制,进一步探究石决明水提液对白内障大鼠晶状体的防护作用。第一部分是前期准备,第二部分是用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法分别来说明石决明水提液对白内障大鼠晶状体上皮细胞内质网应激的影响。第一部分：前期准备目的：制作D-半乳糖诱导白内障大鼠模型及用药,为下一部实验做准备。方法：1实验分组：健康SD大鼠100只,双眼为实验眼(共200枚晶状体),鼠龄为40天,体重在200±10g左右,随机平均分为4组：空白组、模型组、白内停组、石决明组。2模型制作：D-半乳糖诱导白内障大鼠模型制作。3用药：空白组、模型组用生理盐水点眼,石决明组用石决明水提液点眼,白内停组用白内停滴眼液点眼,3次/天,1滴/次。4取材：第15天处死所有大鼠,在无菌操作下,分组取出大鼠晶状体并冻存于-80℃冰箱中备用。结果：第15天散瞳观察大鼠晶状体,参考祁明信、黄秀榕等的晶状体混浊分期标准,其中模型组晶状体的混浊达到了Ⅱ期。白内停组与石决明组晶状体混浊程度比模型组轻,晶状体的混浊程度达到了Ⅰ期。空白组的晶状体透明。结论：石决明水提液能够减轻晶状体的混浊程度,延缓白内障的发展。第二部分：免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法检测内质网应激中CHOP,GRP78,XBP-1mRNA的表达目的：为了进一步探究石决明水提液对白内障大鼠晶状体的防护作用。方法：将取出的大鼠晶状体(空白组、模型组、白内停组、石决明组)分别用免疫组织化学方法检测CHOP (C/EBP homologous protein, C/EBP同源蛋白)的表达,用Western blot方法检测GRP78(78-kDa glucose-regulated protein,78-kDa糖调节蛋白)的表达,用RT-PCR方法检测XBP-1mRNA (X-box binding protein1,X盒结合蛋白1mRNA)的表达。结果：1免疫组织化学方法检测大鼠晶状体上皮细胞CHOP的表达：由免疫组化染色所见,阳性表达为细胞膜和/或细胞质有呈棕黄色的颗粒,则呈阳性表达(图1)。模型组的阳性表达率92.62±2.32%,石决明组的阳性表达率44.72+3.51%,白内停组的阳性表达率45.77±4.54%,空白组的阳性表达率5.74+3.20%(表1)。石决明组的阳性表达率小于模型组(P<0.05)；石决明组的阳性表达率与白内停组无明显差异(P>0.05)；模型组的阳性表达率大于空白组(P<0.01)。2Western blot方法检测大鼠晶状体上皮细胞GRP78的表达：模型组阳性表达0.556±0.16μg/ml,石决明组的阳性表达0.212±0.15μg/ml,白内停组的阳性表达0.321±0.26μg/ml,空白组的阳性表达0.013±0.21μg/ml(表2)。石决明组的阳性表达率小于模型组(P<0.05)；石决明组的阳性表达率与白内停组无明显差异(P>0.05)；模型组的阳性表达率大于空白组(P<0.01)。3RT-PCR方法检测大鼠晶状体上皮细胞XBP-1mRNA的表达：模型组阳性表达9.2±0.04,石决明组的阳性表达2.4+0.02,白内停组的阳性表达6.5+0.03,空白组的阳性表达1.0±0.02(表3)。石决明组的阳性表达率小于模型组(P<0.05)；石决明组的阳性表达率小于白内停组(P<0.05)；模型组的阳性表达率大于空白组(P<0.01)。结论：石决明水提液能减缓白内障大鼠晶状体上皮细胞内质网应激反应,进一步说明石决明水提液对白内障大鼠的晶状体有保护作用,可延缓白内障的发展。