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目的:本研究以雌性C57BL/6小鼠为研究对象,制备实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,通过五子衍宗丸（WYP）灌胃干预,观察不同剂量组小鼠临床症状,筛选最佳给药剂量;检测各组小鼠病理改变及脾脏、中枢神经组织内免疫细胞和炎性因子的表达情况。旨在探讨WYP防治EAE的疗效及其作用机制,并比较发病中期与发病终末期的疗效差异。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型组、WYP高、中、低剂量组。造模前一周开始给药,空白对照组和模型组给予生理盐水(50ml·kg-1·d-1)灌胃,同时WYP高、中、低剂量组给予灌服WYP溶液,浓度分别为16g·kg-1·d-1、8g·kg-1·d-1、4g·kg-1·d-1。造模当天起每天记录临床评分。每组一半小鼠在免疫后第14天处死,另一半小鼠免疫后第28天处死。通过病理切片（伊红-苏木素染色与固蓝染色）观察各组小鼠脊髓组织炎性细胞浸润与脱髓鞘情况。采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏巨噬细胞分型及细胞内IL10和IL12的表达。ELISA法检测各组小鼠脾细胞上清液中IL10、IL17、IL12、TNF-α和IFN-γ的表达量。qRT-PCR法检测各组小鼠脾细胞中TNF-α、TLR4的mRNA含量。Western blot检测各组小鼠脑、脊髓、脾脏中ROCKII、P-MYPT1、TLR4、NF-κB、MCP-1、CCR-2蛋白含量。结果:1.WYP对EAE小鼠的疗效观察1.1 WYP对EAE小鼠一般体征及神经功能评分的影响（1）WYP可改善小鼠神经功能,提高肌张力,增强活动度,缓解食欲下降、精神不振等一般体征。与空白对照组比较,模型组小鼠发病后食欲明显下降、精神萎靡不振、毛发枯槁、小便色黄、大便干结、四肢肌张力严重减弱、活动障碍甚至瘫痪。与模型组比较,WYP高剂量组小鼠食欲尚可、小便色清、大便正常、毛发柔顺、四肢活动力轻微下降;WYP中、低剂量组小鼠食欲不佳、小便微黄、大便正常、毛发粗糙、四肢活动不利。（2）WYP可延缓发病时间,减轻发病程度。与空白对照组比较,模型组临床评分均明显升高（p<0.05）;模型组平均起病时间、平均最高临床评分、平均累计临床评分均明显升高（p<0.001）。与模型组比较,WYP高、中、低剂量组临床评分均降低（p<0.05）,WYP高、中、低剂量组平均起病时间、平均最高临床评分、平均累计临床评分均明显降低（p<0.05）;高剂量组起病时间最晚,临床评分效果最优,高中低剂量组间未观察到量效关系,WYP高剂量为最佳给药剂量。1.2镜下观察WYP对EAE小鼠脊髓组织炎性细胞浸润的影响WYP可抑制炎性细胞浸润脊髓组织。与正常对照组比较,模型组炎性细胞浸润脊髓组织面积明显增多（p<0.001）;与模型组比较,WYP高剂量组炎性细胞浸润脊髓组织面积明显减少（p<0.05）。1.3镜下观察WYP对EAE小鼠脊髓组织脱髓鞘的影响WYP可减少脊髓髓鞘脱失。与正常对照组比较,模型组脊髓白质脱髓鞘面积明显增多（p<0.001）。与模型组比较,WYP高剂量组脊髓白质脱髓鞘面积明显减轻（p<0.05）。2.WYP对EAE作用机制研究2.1 WYP对EAE小鼠免疫细胞功能的影响WYP可促进抑炎型巨噬细胞（M2）的表达,提高抑炎因子（IL10）的表达。与空白对照组比,模型组M2型巨噬细胞表达量增加,抑炎因子IL10表达量增多;与模型组比较,WYP高剂量组M2型巨噬细胞表达量增加,抑炎因子IL10表达量增多（p<0.05）。2.2 WYP对EAE小鼠免疫炎性反应的影响WYP可下调炎性细胞因子IL17、IL12、IFN-γ表达。与正常对照组比较,模型组脾细胞上清液里炎性因子IL17、IL12、IFN-γ分泌量明显增多（p<0.05）;与模型组比较,WYP高剂量组脾细胞上清液里炎性因子IL17、IL12、IFN-γ分泌量明显减少（p<0.05）。WYP可下调TLR-4与TNF-αmRNA表达。与正常对照组比较,模型组脾细胞炎性受体TLR-4与炎性因子TNF-αmRNA表达量均显著升高（p<0.01）;与模型组比较,WYP高剂量组脾细胞炎性受体TLR-4与炎性因子TNF-αmRNA表达量均显著降低（p<0.01）。2.3 WYP对EAE小鼠Rho/ROCK信号通路及NF-κB信号通路的影响与模型组比较,WYP高剂量组脑、脊髓、脾细胞中Rho/ROCK信号通路中ROCKII、P-MYPT1蛋白表达量明显减少（p<0.05）;WYP高剂量组脑、脊髓、脾细胞中NF-κB炎性信号通路中TLR4、NF-κB蛋白表达量明显减少（p<0.05）;WYP高剂量组脑、脊髓、脾细胞中炎症趋化因子、趋化受体（MCP-1、CCR-2）蛋白表达量均明显减少（p<0.05）。结论:WYP可改善神经功能,减轻EAE小鼠临床症状,推迟起病时间。WYP可调节Rho/ROCK信号通路以及NF-κB信号通路,减少神经组织损伤,抑制炎性蛋白的表达。WYP可促进抑炎型巨噬细胞的表达,提高抑炎因子的表达,减少促炎因子的表达。WYP防治EAE的作用机制可能为调节免疫、抑制炎性反应。