环维黄杨星D(cyclovirobuxine D，CVB-D)是从黄杨科植物小叶黄杨的木质部分分离出的生物碱之一。环维黄杨星D是我国近年研制成功的一种治疗心血管疾病的新药，具有行气活血和通络止痛功能，主要用于治疗气滞血淤所致的胸痹心痛、脉结代、冠心病、心律失常等<'[1]>。临床应用显示，环维黄杨星D对多种心律失常、心绞痛、冠心病、心功能不全等心血管疾病具有良好的疗效<'[2]>。但是机制如何，相关报道不多，研究者推断这些作用和药物对细胞膜上离子通道的影响有很大关系。钙离子作为细胞内第二信使，在细胞兴奋，肌肉收缩等反应中起到重要作用。故本课题通过研究CVB-D对豚鼠离体组织和心肌细胞收缩力的影响，以及利用荧光技术观察CVB-D对心肌细胞内钙离子浓度的影响，以期探讨CVB-D对不同钙离子通道的作用，从而进一步研究CVB-D的作用机理。 第一部分环维黄杨星D对离体豚鼠胆道括约肌收缩力的影响 目的：研究环维黄杨星D(Cyclovirobuxine D,CVB-D)对离体豚鼠胆道括约肌的收缩作用。 方法：1)利用离体豚鼠胆道括约肌，加入不同浓度(1×10<'-7>M-3×10<'-6>M)CVB-D，观察由KCl或Ach引起的括约肌快速收缩相和持续相的变化。2)加入维拉帕米(Ver)作用后，再加入CVB-D，观察二者合用对KCl或Ach引起的括约肌收缩变化。 结果：对KCl引起的标本收缩，CVB-D使快速相峰值显著下降，且有量效关系，而持续相呈轻度升高，坪/峰比值也呈剂量．效应的增加。但对Ach引起的收缩，CVB-D使快速相、持续相、坪/峰值均显著下降，且有一定量效关系。Ver使括约肌的快速相及持续相的收缩力下降。合用CVB-D后，对KCl引起的快速收缩相，二者有协同作用，峰值进一步下降，但坪值则与单用 Ver相当。对Ach引起的快速相收缩，二者也有相似的协同作用，但此时坪值几乎消失。 结论：CVB-D对括约肌的收缩作用与引起收缩的刺激剂有关，也与收缩时相有关，反映了CVB-D对不同钙离子通道的影响。 第二部分环维黄杨星D对心肌细胞收缩力的影响 目的：研究环维黄杨星D(Cyclovirobuxine D,CVB-D)对离体豚鼠心肌细胞收缩性能的影响。 方法：1)利用离体豚鼠急性分离的心肌细胞，加入不同浓度(5×lO<'-8>M～1×10<'-6>M)CVB-D，观察在无钙和有钙条件下，CVB-D对心肌细胞收缩力的影响。2)加入咖啡因作用后，再加入不同浓度(5×10<'-8>M～1×10<'-6>M)CVB-D，在无钙和有钙的条件下，观察CVB-D对咖啡因引起的心肌细胞收缩力增强的作用。 结果：1)在细胞外无钙条件下，CVB-D可明显升高心肌细胞收缩幅度。咖啡因也显著升高心肌细胞收缩幅度，但合用CVB-D后，收缩幅度有明显的下降趋势；2)在细胞外有钙条件下，CVB-D对心肌细胞收缩幅度影响不大，略有下降趋势。在此条件下加入咖啡因作用后，细胞也收缩；CVB-D可使收缩幅度有一定的下降，趋势弱于无钙条件下的结果；3)CVB-D对收缩频率和收缩幅度的影响不一致。 结论：CVB-D对心肌细胞内钙释放有一定促进作用，但其可能是ryanodine受体的部分激动剂，对咖啡因引起的心肌细胞收缩力增强产生拮抗作用。 第三部分环维黄杨星D对心肌细胞内钙离子浓度的影响 目的：研究环维黄杨星D(Cyclovirobuxine D，CVB-D)对离体豚鼠心肌细胞内钙离子浓度的影响。 方法：1)利用离体豚鼠急性分离的心肌细胞，加入不同浓度(5×10<'-8>M～1×10<'-6>M)CVB-D，观察在无钙和有钙条件下，CVB-D对心肌细胞内钙离子浓度的影响。2)加入咖啡因预处理后，再加入CVB-D，在无钙和有钙的条件下，观察CVB-D对咖啡因引起的心肌细胞内钙离子浓度升高的影响。 结果：1)在无钙条件下，CVB-D可明显升高心肌细胞内钙离子浓度。用咖啡因预处理后也显著升高心肌细胞内钙离子浓度，再合用CVB-D，内钙离子浓度有明显的下降趋势；2)在有钙条件下，CVB-D对心肌细胞内钙离子浓度影响不大，略有下降趋势，在此条件下加入咖啡因预处理后，CVB-D可使细胞内钙离子浓度有一定的下降，趋势弱于无钙条件下的结果。 结论：CVB-D可促进心肌细胞内钙释放，但作用弱于咖啡因，很可能两者作用产生竞争性拮抗。并且在细胞复钙后，作用不明显，可能被本身较高的内钙水平掩盖。