曼陀罗嫩茎愈伤组织培养及其莨菪碱的分析

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生物碱(alkaloids)是多种植物的次生代谢产物,是一种具有药用活性的化合物。曼陀罗(Datura Stramonium L.)属茄科,曼陀罗属一年生草本植物。其全株含莨菪碱(hyoscyamine)和东莨菪碱(scopolamine),属于莨菪烷类生物碱(Tropane alkaloids, TA)。曼陀罗是莨菪烷类生物碱的资源植物。东莨菪碱是在临床上广泛使用的一种重要的基本药物,市场需求十分巨大。本研究以曼陀罗嫩茎为外植体,进行了曼陀罗愈伤组织,并研究了不同条件对曼陀罗愈伤组织诱导及继代的影响,对培养的愈伤组织进行了莨菪碱的定性和定量分析。为利用植物组织培养技术实现曼陀罗莨菪烷类生物碱的代谢工程奠定了技术基础。比较了不同浓度激素以及其它外界条件对曼陀罗愈伤组织诱导的影响,结果证明:MS+2,4-D1.0mg·L-1是曼陀罗愈伤组织诱导的理想培养基;MS+2,4-D0.5mg·L-1是曼陀罗愈伤组织继代培养的理想培养基;通过在不同光照和温度条件下对其愈伤组织生长的研究表明,在24℃恒温,光照为2000-30001x,12h·24h-1条件下其愈伤组织的长势较好;通过比较不同碳源对其愈伤组织生长的影响,结果表明蔗糖是其生长的理想碳源;曼陀罗愈伤组织继代培养研究发现,30d的液体培养的生长率为30.13%,而固体培养生长率为438%。采用离子交换树脂法从诱导出的曼陀罗愈伤组织中成功的提取出莨菪碱和东莨菪碱并对其进行定性分析和定量分析。通过高效液相色谱法(HPLC)检测曼陀罗愈伤组织中的生物碱含量,结果显示:由愈伤组织提取的生物碱中含有莨菪碱和东莨菪碱。此结果还说明:可以通过组织培养技术快速获取含量较高的莨菪烷类生物碱的曼陀罗愈伤组织,具有非常重要的研究意义和商业价值。
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