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背景和目的:肺癌是全球死亡率最高的恶性肿瘤,严重威胁人类健康。肺癌中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占80%~85%。近年来,表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)成功应用于临床,对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变的肺癌患者有良好的疗效。然而,不幸的是多数原本敏感的NSCLC患者在接受厄洛替尼等TKI治疗6~12个月后会发生耐药而致肿瘤复发。因此,EGFR-TKIs获得性耐药机制成为目前研究的热点。现有研究表明,EGFR-TKIs获得性耐药的机制涉及EGFR T790M二次突变、C-MET基因扩增、以及IGF-1R旁路激活等有方面。IGF-1R旁路激活是指EGFR-TKIs抑制敏感的NSCLC细胞增殖和迁徙的同时,也诱导胰岛素样生长因子1受体(Insulin like growth factor 1 receptor,IGF-1R)的高表达,并以旁路激活的方式激活下游的PI3K/Akt通路,导致肿瘤细胞持续增殖,抑制凋亡,从而对EGFR-TKIs耐药。奥曲肽(octreotide,OCT)是一种人工合成的多肽,不仅有抑制肿瘤增殖、促进肿瘤细胞凋亡的作用,还能调控IGF-1的转录并抑制IGF-1的分泌,理论上有改善EGFR-TKIs耐药的作用,但目前尚未见相关研究报道。本实验拟在通过厄洛替尼诱导人肺腺癌PC9细胞耐药的基础上,探讨OCT能否改善厄洛替尼耐药及其可能的机制。方法:1、PC9/ER耐药细胞系的建立及耐药性的检测:利用低浓度厄洛替尼持续诱导PC9细胞6个月后,建立PC9耐厄洛替尼细胞系PC9/ER,用CCK-8法检测PC9/ER的耐药性。2、OCT对PC9/ER细胞的改善耐药作用:用CCK-8法检测OCT、厄洛替尼+OCT对PC9细胞及PC9/ER细胞生长的作用。流式细胞仪检测对照组、OCT、厄洛替尼及厄洛替尼+OCT作用于PC9/ER后细胞凋亡变化。3、OCT对PC9/ER细胞的改善耐药机制探讨:以厄洛替尼(1μmol/L)和OCT(10μmol/L)单独或联合作用PC9/ER细胞48h,并以常规培养的PC9/ER细胞做对照,Western bolt检测IGF-1R、p-IGF-1R、Akt和p-Akt表达变化;qRT-PCR检测OCT作用PC9/ER细胞后IGF-1、IGF-1RmRNA表达变化;ELISA检测OCT作用PC9/ER后细胞上清IGF-1的表达变化。结果:1、通过0.1μmol/L厄洛替尼诱导PC9细胞6个月后,用CCK-8检测耐药指数,厄洛替尼对PC9、PC9/ER细胞的IC50分别为4.809μmol/L(PC9/ER)和0.4608μmol/L(PC9),耐药指数为10.43,成功建立了耐厄洛替尼PC9/ER细胞。与亲本PC9细胞相比,PC9/ER中IGF-1R、p-IGF-1R、Akt、p-Akt在蛋白水平升高。2、厄洛替尼联合OCT能改善PC9/ER细胞耐药,单用厄洛替尼和联和OCT作用PC9/ER细胞后的IC50分别为4.809μmol/L和0.4998μmol/L,改善倍数为9.62倍。联合用药后PC9/ER细胞的IGF-1R、p-IGF-1R、Akt、p-Akt蛋白表达均降低。3、OCT作用于PC9/ER细胞后,IGF-1R、IGF-1 m RNA水平均表达下调。4、厄洛替尼联合OCT能促进细胞凋亡,和单用厄洛替尼、OCT组相比,作用48h后,联合用药组凋亡率增加。结论:1.成功建立了对厄洛替尼耐药的PC9/ER细胞、且能稳定传代。2.IGF-1R高表达是PC9/ER细胞对厄洛替尼耐药的机制之一。3.OCT联合厄洛替尼通过抑制PC9/ER细胞IGF-1的表达、分泌,抑制IGF-1R及其下游Akt活化而抑制细胞生长,促进细胞凋亡。