miR-200家族在鱼类精巢和胚胎发育中的表达和功能研究

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MicroRNAs(mi RNAs)在脊椎动物的性别分化和性腺发育过程中发挥重要调控作用。黄颡鱼作为我国性别异形经济鱼类的代表,其雌、雄性腺的miRNAs表达谱均未见报道,此外黄颡鱼性腺发育的分子机制仍不清楚。本研究首先通过Solexa深度测序技术检测了3种类型的黄颡鱼性腺(XX型雌鱼卵巢,XY型雄鱼精巢以及YY超雄鱼精巢)。测序数据产生了384个保守的miRNAs和113个潜在的新miRNAs,其中分别有23,30和14个miRNAs在XX卵巢,XY精巢以及YY精巢中特异表达。研究发现黄颡鱼性腺中一些性别差异表达的miRNAs,在其他脊椎动物中也呈现出相似的性别相关的表达模式。我们还观察到miR-200家族成员(包括miR-141和miR-429)在XY精巢的表达水平均比YY精巢的低。组织学分析显示YY超雄鱼的精巢比XY雄鱼的精巢成熟度要高,因为YY超雄鱼的精巢有更大的精小囊,且精小囊中有更多的精细胞和更少的精母细胞。此外,当用高浓度的雌激素处理XY型雄性黄颡鱼,损害其精巢发育和细胞增殖时,5个miR-200家族成员在精巢中的表达水平均显著上调。黄颡鱼mi R-141和miR-429的表达水平随着精巢发育的进程而表达下调,该现象与人类中的报道一致。最后,通过荧光定量PCR检测了随机挑选的9个miRNAs,它们在黄颡鱼性腺的表达模式与高通量测序结果一致。我们的研究结果为不同性别类型黄颡鱼性腺miRNAs转录组分析提供了较为全面的信息,并初步证实了miR-200家族参与调控精巢发育和精子生成。脊椎动物中growth hormone/insulin-like growth factor(GH/IGF)轴在躯体生长方面发挥了重要的调控作用。GH/IGF轴基因的表达水平与一些哺乳动物以及水产养殖鱼类的生长速度的快慢呈正相关。然而GH/IGF轴基因在发育早期的直接调控机制仍不清楚。miR-200家族在脊椎动物中非常保守,它在果蝇中的唯一同源成员是miR-8。MiR-8/200s在躯体生长方面的功能最先在果蝇中发现,被认为是促进生长的因子。但miR-200家族在脊椎动物中是否具有调控生长的作用未见报道。我们对斑马鱼的研究揭示了保守的miR-200家族成员能够调控胚胎大小,他们主要通过靶向一些GH/IGF轴基因(GH,GHRa,GHRb和IGF2a)来发挥作用。过表达miR-200s成员导致细胞停滞在G1期,并且在胚胎时期诱导凋亡反应,因而抑制斑马鱼胚胎的躯体生长。值得注意的是,GH能诱导p53和miR-200s的表达,miR-200s又是p53的潜在转录靶基因,而在p53突变的胚胎中,GH过表达不能诱导mi R-200家族上调。结合以上实验结果,我们得出结论,p53/miR-200s和GH/IGF信号途径形成了一个调控胚胎大小的负反馈路线。这为“硬骨鱼发育早期身体生长是如何确定的”这一长期存在的难题提供了重要的见解。
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