桢楠根腐病病原菌以及拮抗细菌的分离鉴定与植株抗性生理指标分析

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桢楠不仅是国家二级珍稀保护植物,也是名扬海外的珍贵材用树种,主要分布于我国湖北省、贵州省、四川省及重庆市。在满清时期,人们无节制的伐用桢楠树木,致使其野生自然资源几近枯竭,人工培育桢楠已经成为一个新的经济增长点。近年来,成都部分地区首次出现了桢楠根腐病。本试验以大叶桢楠根腐病病株为研究对象,从中分离鉴定出病原菌,并探究了病原菌的培养特性;比较2个桢楠品种对病原菌的抗病能力差异;筛选鉴定了2株对病原菌抑制效果较好的细菌,探究其发酵滤液的抑菌特性,旨在为选育桢楠抗病性材料以及进一步开发桢楠根腐病病原菌生防制剂奠定基础。主要研究结果如下:1.根据柯赫氏法则进行致病性测定,确定病原菌L20170401导致的桢楠健康幼苗发病症状与桢楠根腐病病株样品一致。采用形态学观察和分子生物学鉴定的方法,确定引发大叶桢楠根腐病的病原菌L20170401为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。2.对病原菌的培养特性进行研究表明,病原菌菌丝生长和产孢的最适培养基分别是PDA和PSA培养基,最适温度分别为25℃、30℃;光暗交替处理对病原菌产孢量具有一定的促进作用,对菌丝生长影响不大;当pH为7时病原菌菌丝生长最快,产孢量最大;当温度为54℃,病原菌达到致死温度;最适于孢子萌发的湿度范围为95%~100%。3.测定2种桢楠品种在病原菌侵染后,不同时期叶片中有机溶质和防御酶活性的动态变化。结果表明,在31 d检测范围内,2个品种与对照组各项生理指标的差异不显著。处理组在病原菌侵染后,2个品种的叶绿素均呈急剧下降趋势,PPO、POD、SOD、MDA以及可溶性糖含量先上升后下降。大叶桢楠MDA含量增幅较小叶桢楠小,可溶性糖增速较快,PPO、POD、SOD活性变化幅度较大,POD活性出现了陡增现象,PPO、SOD均出现了急速上升,并有2个峰值,小叶桢楠酶活性变化则相对平缓。综合各项抗性生理指标变化规律可知,大叶桢楠对病原菌的抗病能力较小叶桢楠强。4.筛选鉴定2株对病原菌抑菌效果较好的芽孢杆菌,探究其发酵滤液对病原菌的抑菌特性。研究表明,利用形态学观察、生理生化实验、分子生物学鉴定方法得出,B02菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),B04菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus myloliquefaciens);2株芽孢杆菌对病原菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制效果均明显高于对照组,其中菌株B04对病原菌的抑制效果优于菌株B02。
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