药理学研究证明存在三种主要的阿片受体，阿片类药物的镇痛作用是由这些受体亚型的作用介导。阿片类药物的显著特点是可以产生药物的耐受依赖和成瘾，其细胞和分子生物学的机制已有大量研究和报道，但目前为止，尚不清楚。 NG108-15细胞具有一系列神经元细胞的性质，可以表达CaMKⅡ和DOR以及其他的G-蛋白耦联的受体，因此，可以作为细胞模型用来研究CaMKⅡ在细胞和分子水平作用的材料。本研究采用生化和分子药理学的方法。深入研究Ca²⁺/钙调蛋白激酶信息通路在阿片依赖中的作用。 首先，从牛心肌组织中提取纯化CaMKⅡ，并测定其活性。然后观察δ阿片受体特异性激动剂DPDPE长时程作用于NG108-15细胞，Ca²⁺／CaMKⅡ信息通路的变化；探讨Ca²⁺／CaMKⅡ通路的活性与cAMP水平之间的关系，以及Ca²⁺／CaMKⅡ通路的活性与NOS活性的关系。应用RT-PCR，观察应用DPDPE长时程作用于NG108-15细胞以及应用纳洛酮后，对δ受体表达水平的影响，以探讨阿片依赖的核内机制。 本研究不仅阐明在阿片依赖时Ca²⁺／CaMKⅡ信息通路活性的改变具有重要的理论价值，而且为阿片依赖时Ca²⁺／CaMKⅡ信息通路与其他信息通路之间的相互作用及核内机制提供了实验依据，也为寻找和设计抗阿片耐受成瘾药物治疗提供了新的研究策略和药物作用靶点。 第一部分：从牛心肌提取纯化CaMKⅡ并进行活性测定 1．应用Fluphenazine-sepharose亲和层析从大鼠睾丸中提取并纯化得到10mgCaM，并对产物CaM进行活性测定。 2．应用DEAE-cellulose柱层析及CaM-sepharose-4B亲和层析，从牛心肌提取