第一部分急性冠状动脉综合征患者CD4⁺、CD4⁺CD28^nullT细胞Kv1．3钾通道的表达及意义【目的】研究急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）患者外周血中CD4⁺T细胞及其亚型CD4⁺CD28^nullT细胞活化前后Kv1．3钾通道数目的变化以及Kv1．3钾通道阻滞剂对CD4⁺T细胞活化表达的影响，探讨Kv1．3钾通道在动脉粥样斑块中的意义。【方法】用免疫磁珠法分离出27例ACS患者外周血中的CD4⁺T细胞，其中12例进一步分出亚型CD4⁺CD28^null和CD4⁺CD28⁺T细胞，采用全细胞膜片钳技术记录细胞活化前及经CD3抗体活化72h后的Kv1．3钾电流。CD4⁺T细胞活化时分别加入终浓度为0．1、1、10nmol／L特异性Kv1．3钾通道阻滞剂重组玛格斑蝎毒素（recombinant margatoxin，rMgTX），共同培养72h。用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）法检测CD4⁺T细胞的干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）及颗粒酶B mRNA的表达。【结果】活化后CD4⁺、CD4⁺CD28^nullT细胞的Kv1．3钾通道的峰电流均明显增加，细胞平均通道数分别增加约90％、60％（活化前后每个细胞的通道数分别为402±88比752±275、553±328比874±400；各P＜0．05），具有统计学意义。活化前CD4⁺CD28^nullT细胞Kv1．3钾通道的平均数目比CD4⁺CD28⁺T细胞多约40％（P＜0．05），活化后两者无明显差别（P=0．102）。不同浓度的rMgTX均下调CD4⁺T细胞活化后干扰素-γ、TNF-α、颗粒酶B mRNA的表达，各浓度组间的干扰素-γ、TNF-α、颗粒酶B mRNA的表达均有差别，具有统计学意义（各P＜0．01），rMgTX的浓度越高，各mRNA的表达越低。【结论】ACS患者外周血CD4⁺T细胞及其亚型CD4⁺CD28^nullT细胞活化后Kv1．3钾通道表达增加，特异性Kv1．3通道阻滞剂rMgTX呈浓度依赖性地抑制CD4⁺T细胞活化时干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B mRNA的表达，提示CD4⁺T细胞特别是CD4⁺CD28^nullT细胞的Kv1．3钾通道可能作为预防动脉粥样斑块不稳定的潜在治疗靶点。第二部分急性冠状动脉综合征患者CD4⁺、CD4⁺CD28^nullT细胞IKCa1钾通道的表达及意义【目的】研究ACS患者外周血中CD4⁺T细胞及CD4⁺CD28^null亚型活化前后IKCa1钾通道数目的变化以及IKCa1钾通道阻滞剂对活化的CD4⁺T细胞表达效应分子的影响，探讨IKCa1钾通道对动脉粥样斑块的意义。【方法】用免疫磁珠法分离出24例ACS患者外周血中的CD4⁺T细胞，其中12例进一步分出亚型CD4⁺CD28^nullT细胞，采用全细胞膜片钳技术记录细胞活化前及活化3d后的IKCa1钾电流。CD4⁺T细胞活化3d后分别加入终浓度为0．2、1、5μmol／L特异性IKCa1钾通道阻滞剂TRAM-34，再继续活化3d。用RT-PCR法检测CD4⁺T细胞的干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B mRNA的表达。【结果】活化后，CD4⁺、CD4⁺CD28^null T细胞的IKCa1通道数目分别增加了9倍和8倍（活化前、后2种T细胞的通道数分别为45±18比439±161，56±16比497±174；各P＜0．01），2种T细胞的通道密度均增加了近3倍（各P＜0．01）。活化前、后CD4⁺CD28^null和CD4⁺CD28⁺T细胞之间的通道数目及通道密度均无差别。不同浓度的TRAM-34均下调CD4⁺T细胞活化后干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B mRNA的表达，各浓度组间干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B mRNA的表达均有差异，具有统计学意义（各P＜0．01），TRAM-34的浓度越高，各mRNA的表达越低。【结论】ACS患者外周血CD4⁺CD4⁺CD28^nullT细胞活化后IKCa1的通道数目及通道密度均明显增加，特异性IKCa1通道阻滞剂TRAM-34呈浓度依赖性地抑制活化的CD4⁺T细胞表达干扰素-γ、TNF-α及颗粒酶B，提示活化的CD4⁺T细胞的IKCa1钾通道可能在动脉粥样硬化中起着重要作用，IKCa1钾通道阻滞剂可能用于治疗动脉粥样硬化。