细胞黏附分子L1与动力蛋白Dynamin1相互作用调控阿尔兹海默症发病机制

来源 :汕头大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zuoluo1314
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种持续性神经退行性疾病。AD的病因主要是由于可溶性的单体淀粉样蛋白β(amyloid beta,Aβ)片段聚集,导致原纤维沉积,最终形成淀粉样斑块。L1神经细胞黏附分子(L1 cell adhesion molecule,L1)是200-220 kDa跨膜糖蛋白,含有六个免疫球蛋白(Ig)样结构域和五个纤连蛋白III型重复,以及单通道跨膜区和胞内结构域(L1 intracellular domain,L1-ICD)。前期研究发现,当L1在神经元和神经胶质中过表达时,可显著降低AD小鼠的病理症状,提示L1可能在缓解AD症状中具有重要的生物学功能。动力蛋白Dnm1(Dynamin1)是一种100 kDa的GTP水解酶,参与网格蛋白介导的内吞作用与囊泡循环。先前的研究发现抑制Dnm1的表达可以显着降低N2a-APP695细胞中的Aβ表达水平。表明Dnm1在AD进展中发挥重要作用。因此,我们推测L1可能与Dnm1通过组成蛋白质复合体参与调控Aβ表达水平。研究L1和Dnm1在AD发病进程中的相互作用,及其对Aβ表达水平的调控机制,可以为L1/Dnm1作为潜在的AD临床治疗手段提供理论依据。  目的:研究L1和Dnm1在AD病理过程中的相互作用。  方法:首先我们利用免疫共沉淀和质谱分析推测可能与L1-ICD结合的分子,结果显示在小鼠脑组织中,L1可能与Dnm1存在相互作用。我们进一步利用免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜分别检测两者在HEB细胞和U-87 MG细胞中的表达定位情况。同时,我们利用免疫共沉淀技术和GST pull-down分别在体内和体外验证L1与Dnm1的结合。为了表达GST-L1-ICD和Dnm1功能域重组蛋白,我们构建了质粒pET-32a-Dnm1-full-length,pET-32a-Dnm1-GTPase,pET-32a-Dnm1-MID,pET-32a-Dnm1-PH,pET-32a-Dnm1-GED,pET-32a-Dnm1-PRD,以及pGEX-5X-1-L1-ICD,进而在原核表达系统中表达出GST-L1-ICD,His-Dnm1-GTPase,His-Dnm1-MID,His-Dnm1-PH,His-Dnm1-GED,His-Dnm1-PRD,His-Dnm1-full length,随后通过GST pull-down实验确定L1与Dnm1相互作用结构域。之后我们利用免疫印迹检测过表达Dnm1后N2a细胞中APP的表达水平。免疫组化试验检测AD小鼠中L1与Dnm1的变化情况。  结果:我们的研究结果显示L1和Dnm1在神经细胞中存在共定位。体内和体外研究结果表明L1可以通过其细胞内结构域直接与Dnm1相互作用,进一步研究发现Dnm1可以通过Dnm1-GTPase蛋白质结构域直接与L1-ICD结合。在过表达Dnm1的N2a细胞中,可检测到APP蛋白表达水平降低。与野生型相比,在AD小鼠海马CA1区中L1蛋白水平升高,Dnm1水平降低。进而L1和Dnm1可能组成一个蛋白质复合体在AD发生过程中调节Aβ的表达水平。  结论:L1和Dnm1通过L1-ICD和Dnm1-GTPase结构域直接相互作用组成蛋白质复合体,可能在AD发生过程中调节Aβ的表达水平。这一机制的阐释对L1应用于AD临床治疗,改进AD治疗手段,都具有非常重要的意义。
其他文献
  为公众提供导向正确的文化产品是博物馆的神圣职责,本文结合涿州博物馆(县市级)历史类基本陈列,从历史唯物主义的角度,围绕如何正确解读历史、展示历史、提炼对当今社会有现
聚氯乙烯(PVC)是世界三大通用树脂材料之一,是由氯乙烯单体聚合而成。根据我国的能源储备现状,目前工业化的主要生产方式是通过乙炔与氯化氢进行反应生产氯乙烯单体。工业生产过程中主要使用了活性炭作为载体负载氯化汞作为催化剂,存在的主要问题是活性组分氯化汞的受热挥发,不仅使催化剂失活,同时造成环境污染危害人类健康。因此,为了实现绿色可持续发展战略,开发环境友好的无汞催化剂是研究者亟待解决的问题。前人的研
  本文从博物馆、纪念馆免费开放后,博物馆人如何更好地为社会大众提供优质服务,改变服务理念,创新服务模式,追求教育和服务的目标转型,以及在实践中探索出一条自我完善、自我发
  当高耸入云的烟囱从人们的视野中淡去,"工业时代"的特征逐渐被"信息革命"所取代.人们认识到,工业遗产已成为普遍意义上的文化遗产.保护工业遗产就是保持人类文化的传承,培植
  在重视人文教育的当今,博物馆教育工作有待进一步提高.传统上中国的博物馆大多更加重视保藏和研究功能,而今它们正逐步转向更加突出文化传播、宣传教育和休闲娱乐的功能.在
  博物馆是为社会和社会发展服务的,利用自身资源优势,为公众搭建一个文化交流的平台,满足社会文化需求,寓教于乐,传播文化知识,以志愿者为桥梁更好地融入社会,服务大众。本文以廊
在突发性事件发生的时候,媒体的报道如何应对受众的质疑?受众、媒体和事件怎样才能长期维持“调和”的局面?当突发性事件发生的时候,媒体应该坚持什么样的报道方式、什么样的
江苏省各市2013年初中毕业与升学考试英语试卷(以下简称“各市试卷”)依据《全日制义务教育普通高级中学英语课程标准(实验稿)》(教育部,2001)(以下简称《课标》)的目标要求,
  博物馆是知识的海洋,是趣味的殿堂,要满足广大游客享受文化盛宴的需求,满足人们对精神与文化生活的热切追求,博物馆应根据自身特点,完善职能,探索新的公众服务理念。作为一名博
  驻马店市博物馆是驻马店市唯一一座历史与艺术并重,集收藏、展览、研究、考古、公共教育、文化交流于一体的综合性博物馆,本文根据其现有陈列特点及管理理念等诸多方面,揭示