论文部分内容阅读
本论文对山东半岛地区的4株禽Ⅰ型副粘病毒强毒株进行了分离，对其血清学、临床毒力表现和分子生物学方面进行了研究。
将4株地方强毒株经绒毛尿囊腔接种10日龄鸡胚，鸡胚接种后36—72h鸡胚全身出血，含病毒的尿囊液红细胞凝集效价（HA）为1：160-1：640，并且能被ND标准阳性血清所抑制，不能被AI标准阳性血清所抑制。人工发病实验结果表明3株鸡源禽Ⅰ型副粘病毒属于强毒株，鸽源禽Ⅰ型副粘病毒对鸡不发病，对鸽则表现为强毒株。
为了探讨山东半岛地区NDV毒力分布情况，将分离获得的其中3株NDV的鸡胚平均致死时间（Mean death time，MDT）、1日龄雏鸡脑内致病指数（Intracerebral pathogenicity index，ICPI）和6周龄鸡静脉内致病指数（Intravenous pathogenicity index，IVPI）进行测定。NDV—PL（蓬莱）株、NDV—ZY（招远）株、NDV—LZ（莱州）株的MDT分别为63.23、60、61.5，ICPI分别为0.9、1.83、1.5，IVPI分别为2.35、2.74、2.61，结果表明3株NDV中，NDV—LZ株的各项指标均为强毒力病毒，NDV—ZY株和NDV—PL株除ICPI结果显示为中等毒力病毒外，其余结果均显示为强毒力病毒，表明这3株新城疫病毒毒株对鸡有较强的致病力。
利用自己设计的引物和参考已发表的引物，通过一步法RT—PCR扩增出三个毒株的479bp的片段和两个毒株的497bp的片段，这两个目的片段含有F蛋白的酶切裂解位点。将目的片段在72℃加腺苷酸尾后，克隆至pGEM—T Easy载体中，构建了相应的重组质粒，经酶切与PCR鉴定后，送交测序并贮存基因。4株cDNA测序结果表明，各毒株的酶切裂解位点都符合强毒株的酶切裂解位点的序列，表明我们所分离的毒株都属于强毒株。
针对F基因479bp和497bp片段，通过DNASIS软件构建了相应的系统发育树，系统发育分析表明山东半岛地区禽Ⅰ型副粘病毒与欧美及中东地区基因群明显分离，但鸽瘟病毒与东北地区禽Ⅰ型副粘病毒的同源性很高。