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目的:检测CYB5D2蛋白在宫颈组织中的表达情况,分析CYB5D2表达水平与宫颈癌临床病理参数及生存预后的关系,及其与上皮细胞间质转化反应(epithelial-mesen chymal transitions,EMT)代表性标志物E-cadherin的相关性,初步探讨CYB5D2在宫颈癌侵袭转移过程中临床意义。进一步研究过表达CYB5D2基因对人宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭转移中的影响及潜在的分子机制,以期为临床探索宫颈癌基因治疗提供新的靶向位点。方法:(1)免疫荧光实验检测CYB5D2和E-cadherin在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义;(2)本研究中宫颈癌HeLa细胞分为过表达CYB5D2实验组和空载对照组,Western blot和qRT-PCR实验检测各组HeLa细胞中CYB5D2蛋白及mRNA表达情况;(3)MTS法、平板克隆形成实验检测过表达CYB5D2对HeLa细胞增殖能力的影响;(4)流式细胞术检测过表达CYB5D2对HeLa细胞周期的影响;(5)划痕实验检测过表达CYB5D2在HeLa细胞迁移率的变化,从而反应对细胞迁移能力的影响;(6)Transwell侵袭实验检测过表达CYB5D2对HeLa细胞侵袭的影响;(7)ELISA实验检测过表达CYB5D2对HeLa细胞上清中分泌MMP2、MMP9的影响;(8)Western blot实验检测过表达CYB5D2对HeLa细胞EMT损伤反应相关蛋白E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Snail、Twist、Zeb2的变化。结果:(1)免疫荧光结果显示,与19例正常宫颈组织、23例宫颈上皮内瘤变组织相比,CYB5D2和E-cadherin蛋白在99例宫颈癌组织中表达水平显著减弱(P<0.05);二者在不同类型的宫颈组织中表达均呈正相关(P<0.05);CYB5D2的表达与肿瘤的临床FIGO分期有关(P<0.05),E-cadherin的表达与肿瘤浸润深度、分化程度、临床FIGO分期有关(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,高表达CYB5D2 mRNA宫颈癌患者OS及RFS显著增加(P<0.05);(2)Western blot和qRT-PCR结果显示,与空载对照组细胞相比,实验组HeLa细胞内CYB5D2蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0.05);(3)MTS结果显示,过表达CYB5D2实验组HeLa细胞增殖速度、细胞数量明显低于对照组(P<0.05);平板克隆形成实验结果显示,过表达CYB5D2实验组细胞集落形成数目、集落大小明显低于对照组(P<0.05);(4)流式细胞术结果显示,过表达CYB5D2实验组HeLa细胞中处于G0/G1、G2/M、S期细胞占比变化不大(P>0.05);(5)细胞划痕实验结果显示,过表达CYB5D2实验组HeLa细胞平均迁移率显著低于对照组(P<0.05);(6)Transwell侵袭实验结果显示,过表达CYB5D2实验组HeLa细胞发生侵袭的细胞数目显著低于对照组(P<0.05);(7)ELISA实验结果显示,过表达CYB5D2实验组HeLa细胞上清中MMP2、MMP9的分泌量显著低于对照组(P<0.05);(8)Western blot实验结果显示,过表达CYB5D2实验组HeLa细胞中E-cadherin、β-catenin蛋白表达逐渐升高,N-cadherin、Snail、Twist、Zeb2蛋白表达逐渐减少(P<0.05)。结论:(1)在宫颈癌中,CYB5D2作为抑癌基因,有望成为评估宫颈癌患者预后标志物的潜在可能;(2)过表达CYB5D2对人宫颈癌HeLa细胞具有增殖抑制、迁移抑制、侵袭抑制作用;(3)CYB5D2对人宫颈癌HeLa细胞发挥抑制作用的机制可能通过调控E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Snail、Twist、Zeb2等蛋白及转移相关因子MMP2、MMP9的表达,进而逆转EMT反应的发生,从而在宫颈癌中作为抑癌基因来发挥潜在的生物学效应。