激素处理对小鼠植入前胚胎发育及胚胎冷冻解冻效果的影响

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小鼠是胚胎工程研究中常用的动物之一,同时,小鼠还是基因功能和人类疾病研究常用的模型动物。为了进一步拓展研究领域,同时为家畜育种提供一个可资参考的技术体系,建立高效的小鼠胚胎操作平台是本实验室近期的主要目标之一。本试验通过对小鼠腹腔注射不同剂量超排激素(5IU PMSG+5IU HCG和10IU PMSG+10IU HCG),观察了对小鼠植入前胚胎发育、胚胎冷冻解冻效果及卵巢组织和血清中蛋白成分变化的影响,这些数据的积累能为本实验室建立高效的小鼠胚胎操作平台奠定基础。实验首先筛选了最适合昆白小鼠胚胎发育的培养液。小鼠胚胎分别培养在KSOM.M16、CZB三种培养液中,4天之后观察囊胚率,各组之间差异显著(分别为75.94%、46.07%、63.93%,P<0.05),KSOM发育率明显高于其他两组。因此随后的实验均采用KSOM作为培养液。其次在含有不同浓度的牛磺酸(0mM、2.5mM、5mM、10mM、50mM)的KSOM中培养小鼠胚胎,4天后观察囊胚率,各处理组差异并不显著(分别为75.76%、77.45%、73、56%、73.06%、71.78%,P>0.05),因此以后的KSOM中不添加牛磺酸。最后使用不同浓度激素(5IU PMSG+5IU HCG和10IUPMSG+10IU HCG)对小鼠进行超排,观察囊胚发育情况(囊胚率分别为76.45%、67.08%,P<0.05),各处理组差异显著。在使用不同剂量激素(5IU PMSG+5IU HCG和10IU PMSG+10IU HCG)对小鼠进行超排后,运用时间飞行质谱分别检测不同处理样品的蛋白含量差异。对照组存在特异表达蛋白gi19116236,5IU PMSG+5IU HCG处理组存在特异表达蛋白gi19116236和gi148669394,10IU PMSG+10IU HCG处理组中没有检测出特异蛋白。gi19116236和gi148669394两种蛋白的结构和功能尚不清楚;经不同激素处理后在卵巢样品检测中并未发现特异蛋白。在使用不同剂量激素(5IU PMSG+5IU HCG和10IU PMSG+10IU HCG)对小鼠进行超排后,将获得胚胎进行冷冻解冻,10IU激素组合胚胎复苏率和囊胚率高于5IU且差异显著(86.03%、73.63%VS82.93%、67.95%,P<0.05)。总之,本研究结果说明在KSOM胚胎培养液较适合昆白小鼠植入前胚胎培养;5IU PMSG+5IU HCG超排激素组合较适合小鼠植入前胚胎发育;10IU PMSG+10IU HCG超排激素组合更适合对胚胎冷冻解冻的小鼠进行超排;利用不同激素组合进行超数排卵,会导致血清中特异蛋白表达出现差异,5IUPMSG+5IU HCG超排激素组合促进小鼠血清中gi148669394蛋白的释放,10IUPMSG+10IU HCG超排激素组合抑制小鼠血清中gi19116236和gi148669394两种蛋白的释放。
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