从蛇足石杉中分离纯化石杉碱甲的工艺研究

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蛇足石杉是我国的传统中药,在民间用于利尿止血,痉挛肿痛已有几千年的历史。近年来,从蛇足石杉中提取的一种生物碱成分——石杉碱甲,具有抑制乙酰胆碱酯酶的活性,用于老年痴呆症的治疗,并被认为是最有前景的一类药物。虽然石杉碱甲及其类似物的化学合成已有报道,但因其合成成本过高,利用植物提取目前仍是石杉碱甲的主要来源。本文在详细总结了目前天然产物及中草药有效成分的提取和分离的基础上,简要介绍了石杉碱甲(Huperzine A,Hup A)结构、性质、应用及其提取理论,并对石杉碱甲的含量分析、提取和纯化工艺进行了研究。在研究中,我们首先建立了适合目标产物的快速、准确、重现性好的HPLC分析检测方法,作为在分离过程中跟踪检测目标产物的手段,并应用于蛇足石杉植物的不同部位石杉碱甲含量测定。色谱条件:色谱柱:Symmetry C18柱;流动相:乙腈:0.028M KH2PO4(12:88);检测波长:311nm;灵敏度:0.01AUFS。石杉碱甲对照品溶液质量在0.8—4.0μg内与峰面积呈良好线性关系,r为0.99964;回收率为100.098%,RSD=1.28%。比较了5种酸的浸提效果,从中选择了浸提的最佳溶剂为盐酸水溶液,同时采用正交试验确定了浸提石杉碱甲的最佳工艺条件为:用1.0%盐酸水溶渗漏,料液比例1:30,时间为30小时,石杉碱甲的回收率能达到90.36%。研究了用活性炭对蛇足石杉提取液进行浓缩、富集。表明提取液通过活性炭浓缩富集后,石杉碱甲的纯度可以达到2.7%。在此基础上再用正相色谱介质硅胶、氧化铝,反相色谱介质C18键合硅胶,腈基键合硅胶纯化精制石杉碱甲,对比发现,采用腈基键合硅胶纯化石杉碱甲,产品的纯度最终能达到92.7%,回收率也较高,达到了93.12%。本文创新之处在于建立了分析石杉碱甲的方法,研究了从提取到分离纯化石杉碱甲的新工艺,与传统方法相比,本工艺提高了石杉碱甲的纯度和回收率,为大规模生产石杉碱甲提供了良好的基础。
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