五味子木脂素气泡辅助双水相浮选提取与高速逆流色谱分离工艺研究

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五味子为木兰科植物五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.)的干燥成熟果实,味酸、甘,性温。具有收敛固涩,益气生津,补肾宁心的功效。五味子主要成分包括:木脂素、挥发油、有机酸、多糖类,其中木脂素类是五味子的主要成分。现代药理学研究表明,五味子木脂素成分具有明显的抗氧化作用,可以保护心脏免受脂质过氧化的损伤,对心脑血管、肾脏具有良好作用。本文以五味子果实为研究对象,优化了五味子果实木脂素的绿色提取和高效分离纯化技术体系,为五味子果实的深入开发提供了物质基础。1.建立了高效液相色谱RP-HPLC同时检测五味子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素及五味子丙素的分析方法。色谱柱:Diamonsil C18(5μm,250 mm×4.6 mm i.d.),流动相:0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)被选为最佳流动相体系。优化后的液相色谱梯度洗脱条件为:梯度洗脱,0–35 min,40%-75%B;35–45 min,75%-80%B;检测波长:254 nm,流速:1 m L/min,柱温:30℃,进样量:5μL。结果表明,七种目标化合物R~2>0.999,检测范围内展现良好的线性相关,重复性、精密度及稳定性良好,加样回收率结果准确。2.以乙醇-硫酸铵两相体系为绿色溶剂,优化了气泡辅助双水相浮选法提取五味子木脂素成分最佳的提取工艺参数。双水相组成32.49w%盐浓度和22.67w%乙醇浓度,浮选时间16.58 min,浮选速率68.75 m L/min。在最佳条件下,五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素的最高提取率分别达到8.77 mg/g、2.15mg/g、0.88mg/g、0.68 mg/g、1.33 mg/g、2.91 mg/g及0.18 mg/g。七种目标成分的提取率为传统有机溶剂提取方法的1.47倍,且该提取过程快速绿色高效。3.确定了高速逆流色谱快速分离纯化五味子中四种木脂素成分的分离工艺。溶剂体系为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(6.1:3.9:6.1:3.9,v/v/v/v),洗脱流速2 m L/min,洗脱转速850 rpm/min,检测波长254 nm,上样量200 mg。通过高速逆流色谱的分离纯化和重结晶后,从五味子中分离得到4种木脂素类成分即五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯乙、五味子乙素,纯度分别为97.37%、96.47%、97.94%及92.81%,回收率分别可达92.05%,97.59%,90.48%及90.59%。本研究建立了一种绿色高效的气泡辅助双水相浮选(BA-ATPF)与HSCCC相结合的技术,用于提取分离五味子中的主要木脂素成分。该技术体系可以高效快速实现五味子中木脂素的绿色提取和分离纯化,该技术具有良好规模化和产业化应用的潜力。
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