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目的:在体外实验中,观察桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC-823细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用及凋亡相关基因表达的影响,为其成为防治肿瘤的菌类药物提供实验依据。 方法:选用人胃癌BGC-823细胞株进行体外培养,用MTT比色法测定不同方法提取的桦褐孔菌提取物对胃癌BGC-823细胞株的抗增殖作用。应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、吖啶橙-溴化乙锭(AO/EB)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察细胞凋亡形态学变化。通过脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)和AO/EB双染色法检测细胞凋亡率。应用流式细胞术进行定量并作细胞周期分析。采用免疫细胞化学染色法检测药物处理前后Ki-67抗原及凋亡相关基因产物bax,bcl-2,caspase-3,caspase-9蛋白的表达。 结果:1)MTT实验结果表明:桦褐孔菌的水提取物、乙酸乙酯提取物、石油醚提取物在10μg/ml~80μg/ml范围内,于12h、24h、48h、72h对胃癌BGC-823细胞株均有抑制生长作用,并表现出浓度、时间依赖性关系,上述提取物在终浓度80μg/ml、于48h时,体外最大抑制率分别达到51%、62%、60%,桦褐孔菌的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物对人胃癌BGC-823细胞株生长抑制作用高于水提取物。2)HE染色光镜下,实验组BGC-823肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞膜起泡形成凋亡小体;倒置显微镜下,实验组BGC-823肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;AO/EB双染色荧光显微镜下,实验组BGC-823肿瘤细胞胞核染色质呈橘红色,胞质内的橘红色或橘黄色荧光消失,细胞周围可见亮绿色荧光的凋亡小体;透射电镜观察,80μg/ml桦褐孔菌水提取物处理后的凋亡肿瘤细胞核染色质固缩、边集,胞质内有空泡出现,还可见凋亡小体凸出细胞表面。3)AO/EB双染色细胞凋亡半定量方法结果,80μg/ml桦褐孔菌水提取物作用BGC-823胃癌细胞12h、24h、48h、72h,凋亡率分别为3.5%、10%、25%、15%,不同时间段相比有统计学差异(p<0.01或