CTGF对小鼠术后腹膜粘连形成的影响及机制的实验研究

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目的通过检测小鼠术后腹膜粘连组织中CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA及蛋白表达情况,探讨结缔组织生长因子(CTGF)在术后腹膜粘连形成过程中的作用及其机制。方法105只昆明小鼠随机分成正常对照组、假手术组、模型组,每组35只。正常对照组仅麻醉不作其他任何处理;假手术组小鼠麻醉后,切开进入腹腔,直接关腹;模型组制备成腹膜粘连模型。在术后分别于7个时间点(第3、6、9、12、15、18和21天)处死小鼠,每个时间点每组随机各处死5只小白鼠,采取随机双盲法,对腹膜粘连程度进行评估,并留取标本,应用HE染色观察病理变化、Masson ,s三色染色观察胶原沉积、RT-PCR法检测标本组织中CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA表达及免疫组织化学法检测标本组织中CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的蛋白表达。结果1、术后各时间点正常对照组和假手术组观察区均未形成粘连;模型组随着术后时间推移,腹膜粘连评分逐渐增高,粘连评分与术后时间递增呈显著正相关(r=0.718, P<0.05)。2、各组标本组织中的胶原沉积:正常对照组与假手术组胶原沉积面积百分数无显著差异(P>0.05),模型组胶原沉积面积百分数显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05),模型组胶原沉积面积百分数与术后时间递增呈显著正相关(r=0.981,P<0.05)。3、各组标本组织中CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA表达:两组间比较正常对照组与假手术组CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);模型组CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA表达水平显著高于正常对照组和假手术组(P<0.05);术后各时间点模型组CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA表达水平均显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05)。模型组CTGF的mRNA表达水平与腹膜粘连评分呈明显正相关(r=0.444,P<0.05);术后第3-18天CTGF的mRNA表达水平与胶原沉积面积百分数呈显著正相关(r=0.654,P<0.05);模型组CollagenⅠ与CTGF的mRNA表达水平呈显著的正相关(r=0.787,P<0.05);术后第6-21天,模型组TIMP-1与CTGF的mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.665, P<0.05)4、各组标本组织中CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的蛋白表达:两组间比较正常对照组与假手术组CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的蛋白表达水平无显著差异(P>0.05);模型组CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的蛋白表达水平显著高于正常对照组和假手术组(P<0.05);术后各时间点模型组CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的蛋白表达水平均显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05)。模型组CTGF的蛋白表达水平与腹膜粘连评分呈显著正相关(r=0.617,P<0.05);模型组CTGF的蛋白表达水平与胶原沉积面积百分数呈显著正相关(r=0.530,P<0.05);模型组CollagenⅠ与CTGF的蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.555,P<0.05);模型组TIMP-1与CTGF的蛋白表达水平有显著正相关(r=0.850,P<0.05)。结论1、小鼠术后腹膜粘连组织中CTGF、CollagenⅠ、TIMP-1的mRNA及蛋白呈高水平表达;2、CTGF mRNA及蛋白表达水平随腹膜粘连评分和胶原沉积增高而增高,CTGF可能是影响术后腹膜粘连形成的重要细胞因子;3、CTGF可能通过促进CollagenⅠ蛋白高表达,影响ECM的沉积;促进TIMP-1高表达,改变纤维蛋白溶解平衡,导致术后腹膜粘连形成。
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