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目的机械通气诱发肺损伤(ventilation induced lung injury, VILI)是指应用呼吸机时由于机械通气诸多因素和肺部原发病交叉作用引起的肺损伤。其根本原因是肺泡膜的完整性破坏及通透性的改变,紧密连接(tight junction, TJ)蛋白是维持黏膜上皮机械屏障和通透性的重要结构,主要包括Zo-1、Claudin和闭锁蛋白(Occludin)等。研究表明,在炎症、低钙、过氧化氢等刺激下,细胞内PKC,Src等蛋白激酶以及蛋白磷酸酶PP2A、PP1等被激活后,作用于Occludin其分子结构中不同位点,使其磷酸化和去磷酸化,从而调节Occludin蛋白的表达,调控细胞间的TJ降解或者形成,所以本实验通过建立不同潮气量机械通气大鼠模型,研究不同潮气量对大鼠肺组织Occludin蛋白表达的影响,使用PKC抑制剂调节Occludin蛋白的表达来研究Occludin蛋白的表达量变化与VILI的关系。方法SPF级健康Wistar大鼠30只,雌雄各15只,体重250-300g,实验前12h禁食,自由饮水。将大鼠随机分为5组(n=6):对照组(C组)、小潮气量组(S组)、小潮气量+PKC抑制剂组(S+P组)、大潮气量组(L组)、大潮气量+PKC抑制剂组(L+P组)。用10%水合氯醛3.5mg/kg腹腔注射麻醉大鼠后,颈部正中切开置入气管导管,设定大潮气量组VT为42ml/kg,小潮气量组VT为7ml/kg,呼吸频率RR为40次/min,吸呼比为I:E1:2,呼吸末正压通气PEEP为0,吸入氧浓度Fi02为21%,机械通气时间为4h。S+P组、L+P组于麻醉前1h肌肉注射PKC抑制剂Bisindolylmaleimide I0.12mg/kg。C组在气管切开后,其它四组自机械通气4h后自颈总动脉放血处死大鼠,留取血液标本并进行肺灌注冲洗干净后取肺组织。钳夹左主支气管,取右肺中上叶,置于冻存管速存液氮,用于Western blot检测Occludin的表达;取右下肺组织在多聚甲醛中固定48-72h,用于HE及免疫组化染色观察肺组织病理学改变及Occludin的分布;左肺组织用吸水纸吸去肺表面水分和血液后称湿重,然后置于烤箱(70℃,72h)烤至恒重,称干重,计算肺的湿/干重(W/D)比。结果肉眼可见L组肺组织表面近主支气管处有散在出血,肺水肿肺出血明显,其他各组病理改变不明显。光镜下观察,S组肺泡壁轻度增厚,血管周围无明显炎症细胞浸润,肺泡腔内无明显渗血而L组肺组织失去正常的结构,肺泡腔渗血严重,周围有炎症细胞浸润,甚至有非透明膜的形成,病理改变较重,而其他3组肺泡结构未见明显异常。S+P组和L+P组肺组织病理学损伤较S组和L组减轻。免疫组织化学发现Occludin蛋白主要表达在肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞。与C组比较,其余4组Occludin蛋白表达下调,肺组织W/D比升高(P<0.05),与S组比较,L组Occludin蛋白表达下调,肺组织W/D比升高,S+P组Occludin蛋白表达上调,肺W/D比降低(P<0.01);与L组比较,L+P组Occludin蛋白表达上调,肺组织W/D比降低(P<D.01),差异具有统计学意义。结论大潮气量机械通气导致肺水肿,肺组织损伤,并且诱发肺组织Occludin表达减少,应用PKC抑制剂可延缓或阻止Occludin蛋白的表达下降,从而缓解机械通气介导的肺损伤。因此认为VILI可能与Occludin蛋白的表达减少有关。