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一、目的:根据广西肿瘤防治研究所病理研究室80年代已成功建立的AFB1致大鼠肝癌前病变短期体内实验动物模型,探索用二乙基亚硝胺(DEN)致大鼠肝癌前病变的最佳剂量;观察金花茶(Camellia chrysantha,CCT)茶花及不同浓度的金花茶浓缩液对DEN诱发大鼠肝癌前病变的作用。二、方法:1、致肝癌前病变DEN剂量实验:37只健康雄性Wistar大鼠,6周龄,体重115±10g,随机分为四组。A组:9只,DEN剂量150mg/kg.bw,2-AAF浓度0.015%(二乙基氨基芴,100g饲料中含0.015g的2-AAF,下同);B组:10只,DEN剂量100mg/kg.bw,2-AAF浓度0.015%;C组:9只,DEN剂量150mg/kg.bw,2-AAF浓度0.010%(100g饲料中含0.010g的2-AAF,下同);D组:9只,DEN剂量100mg/kg.bw,2-AAF浓度0.010%。各组动物进入实验室适应环境1周后,腹腔注射一剂不同剂量的DEN,间隔2周后饲以含不同浓度2-AAF的饲料2周。并于饲该饲料的第7天在乙醚全麻下行肝脏大部分(2/3)切除术做为促癌程序,停2-AAF饲料后喂食基础饲料2天,然后禁食24小时,处死所有动物。取出肝脏,在肝特定部位取出5块组织,厚约2mm,立即固定于冷(-4℃)酒精-丙酮(1:1/V:V)固定液,24h之后进行固定、低温(52～54℃)石蜡包埋、切片并进行γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)染色,观察并统计每张切片中每个γ-GT阳性灶的面积(mm~2/个)、单位面积中灶的个数(个/cm~2)、单位面积中灶的总面积(mm~2/cm~2)。2、金花茶实验:91只健康雄性Wistar大鼠,6周龄,体重115±10g,随机分组法分为7组,每组13只,A、B、C、D、E、F、G组分别为茶叶渣组、5%茶花组、2.5%、5%、7.5%、10%的金花茶浓缩液组、DEN对照组。动物进入实验室1周适应环境后,A、B两组分别连续给含有不同受试物的饲料3周,同时C、D、E、F组进行金花茶浓缩液灌胃3周,对照组G组一直喂正常饲料3周;在实验的第3周每只动物腹腔注射一剂DEN,剂量为100mg/kg.bw,注射2周后开始喂含0.015%的2-AAF饲料2周,并于饲此饲料的第7天在乙醚麻醉下行肝大部分切除术作为促癌程序,大鼠停2-AAF饲料后换食正常饲料2天,然后禁食24小时,断颈处死所有动物。实验过程中肝切时各组随机选取一只大鼠的肝切组织进行固定、包埋、切片。实验结束时处死的每只动物取五块肝组织进行固定、包埋、切片,做γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)酶染色,观察并统计每个γ-GT阳性灶的面积(mm~2/个)、单位面积灶的个数(个/cm~2)、单位面积灶的总面积(mm~2/cm~2)。同时各组的肝切和处死组织切片做增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,观察各切片中PCNA阳性细胞的特点,并与γ-GT阳性细胞灶作比较。三、结果:1、DEN剂量实验:A、B、C、D组γ-GT阳性灶总面积(mm~2/cm~2)分别为9.85±4.17、5.72±3.83、8.81±3.70、6.33±2.97;单位面积阳性灶个数(个/cm~2)分别为56.39±17.80、36.90±23.09、53.97±16.17、40.40±11.82;每个阳性灶的面积(mm~2/个)分别为0.16±0.07、0.15±0.05、0.13±0.03、0.14±0.05。各组灶总面积及单位面积阳性灶个数以B组为最少。2、金花茶实验:A、B、C、D、E、F、G组大鼠肝脏的γ-GT阳性灶总面积(mm~2/cm~2)分别为:5.23±2.99、1.59±1.16、1.94±1.34、1.85±1.19、2.59±2.53、1.65±1.18、6.39±2.76,单位面积阳性灶个数(个/cm~2)分别为:37.08±17.34、16.24±8.80、17.74±9.80、14.57±8.11、26.19±22.00、12.89±9.08、45.58±13.01,B、C、D、E、F组灶总面积(mm~2/cm~2)及单位面积阳性灶个数(个/cm~2)均明显小于对照组G组及茶叶渣A组(p＜0.05)。每个阳性灶的面积(mm~2/个)分别为:0.13±0.03、0.10±0.02、0.10±0.03、0.10±0.04、0.10±0.05、0.11±0.03、0.12±0.04;各组之间无显著差异(p＞0.05)。A、B、C、D、E、F、G组的肝重体重比分别为:1.97±0.46、2.30±0.34、2.45±0.24、2.64±0.15、2.50±0.30、2.46±0.25、1.94±0.19,金花茶茶花及不同浓度的金花茶浓缩液组肝重体重比明显大于茶叶渣组及DEN对照组(p＜0.05)。增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞增生灶与r-GT阳性增生灶基本重叠,两种增生灶的个数经统计学分析无显著性差异(p＞0.05)。四、结论:1、二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前病变的最适剂量为DEN剂量100mg/kg.bw,2-AAF浓度0.015%。2、金花茶茶花及其制成品金花茶浓缩液对DEN诱导的肝细胞癌前病变有抑制作用,可用于肝癌的早期预防。3、不同浓度金花茶浓缩液对大鼠肝癌前病变均有抑制作用,并且随着浓度的增加抑制作用增强,呈现一定的剂量—效应趋势,金花茶的有效成分主要是水溶性的物质。4、增殖细胞核抗原(PCNA)细胞增生灶与r-谷氨酰转肽酶(r-GT)阳性细胞灶结果基本一致,可能会成为一种新的衡量肝癌前病变的指标之一。5、金花茶茶花及浓缩液有抵抗DEN对大鼠肝脏的毒性作用,对肝脏具有一定的保护作用。