论文部分内容阅读
第一部分Claudin在铜绿假单胞菌感染所致急性肺损伤中表达变化情况目的本实验通过建立大鼠肺损伤模型,旨在研究claudin在铜绿假单胞菌(PA)感染所致急性肺损伤(ALI)中的表达变化情况及其可能的意义。方法实验选用清洁级SD大鼠,随机分为正常大鼠(N组)、阴性对照组(C组)和铜绿假单胞菌组(P组),C组和P组分别设气道滴入生理盐水(NS)或PA后3h、9h和24h三个时间点。腹主动脉抽血行动脉血气分析；腹腔放血处死后,收集肺组织标本,行肺泡灌洗术,检测肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度；HE染色光镜下观察肺组织病理改变情况并行肺损伤评分,以评价造模后肺损伤程度。检测肺组织mRNA及蛋白水平claudin-3、-4、-18和-5表达,以观察PA感染所致肺损伤中claudin表达变化情况。结果P组各个时间点动脉血氧分压均较N组和C组各个时间点下降,P-24h下降与P-3h、P-9h比较有显著差异：BALF中总蛋白浓度P组较N组和C组各个时间点有明显升高,P-3h、P-9h、P-24h总蛋白浓度显著逐渐增高。光镜下可见P组有明显病理改变,P-3h有少许炎性细胞浸润；P-9h肺泡腔增宽,肺泡间隔内大量中性粒细胞浸润：P-24h可见肺泡间隔增宽更为明显,有大量中性粒细胞浸润,伴肺泡间隔内毛细血管扩张、充血和部分肺不张；肺损伤评分P-24h显著高于P-3h、P-9h。Claudin-4、-18和-5mRNA在P-24h时显著增高而claudin-3mRNA则无明显变化；claudin-3、-4、-18和-5蛋白水平均无明显变化。结论1.大鼠气道内注入PA出现病理生理学变化,时间越长损伤越明显,以P-24h损伤最为严重。2.Claudin-4、-18和-5mRNA在损伤最重的P-24h表达明显高于其他时间点以及C组、N组,而claudin-3、-4、-18和-5蛋白水平则没有明显改变,肺组织中claudin-4、-18和-5mRNA增高可能是肺损伤早期增强上皮屏障功能的一种保护性机制。第二部分Claudin在铜绿假单胞菌所致急性肺损伤中表达变化的意义目的本实验通过建立大鼠肺损伤模型,观察PA引起的claudin表达改变对紧密连接(TJs)结构的影响,并在BALF中检测claudin蛋白的变化,分析其与肺损伤程度的相关性,以了解claudin对肺损伤的意义。方法电镜下观察肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞以及上皮细胞之间的TJs结构；检测肺组织表面活性蛋白SP-A、SP-B和SP-C,假性血管性血友病因子(vWF)mRNA表达情况；行肺泡灌洗术,检测BALF中claudin-3、-4、-18和-5浓度并对BALF中claudin的含量与肺损伤评分做spearman相关分析,分析claudin表达变化在急性肺损伤中的意义。结果电镜观察P组肺组织超微结构呈现病理变化,P-3h肺泡上皮细胞轻度破坏,细胞之间TJs较正常。P-9h肺泡上皮细胞特别是I型肺泡上皮细胞明显破坏,肿胀、呈空泡状,TJs不紧密。P-24h I型肺泡上皮翘起、呈空泡状、部分上皮结构消失,可见内皮细胞破裂,严重处可见气血屏障三层结构均破坏,TJs结构不易在镜下找到。肺组织SP-A、SP-B、SP-C及vWF mRNA表达P组各个时间点与C组各个时间点及N组之间均无显著变化。BALF中claudin-3、-4和-18在N组和C组各个时间点含量均较低,而在P组明显增高,且P-3h、P-9h、P-24hBALF中claudin含量显著逐渐增高,spearman相关分析显示BALF中claudin-3、-4和-18含量分别与肺损伤评分显著正相关。Claudin-5在N组和C组各个时间点含量低,在PA造模后3h迅速增高,9h、24h较3h略有增高,claudin-5与肺损伤评分无明显相关性。结论1BALF中Claudin-3、-4和-18含量在P-3h、P-9h和P-24h逐渐升高,并与肺损伤严重程度正相关,可能成为PA感染所致ALI早期肺泡上皮细胞损伤潜在的分子标记物。2.BALF中claduin-5含量在3h、9h和24h均升高但与肺损伤严重程度无明显相关,提示BALF中claduin-5含量增高不能作为早期肺损伤微血管内皮细胞破坏的分子标记物。