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该文主要是通过构建报告载体初步确定了SATB1的启动子序列,并通过报告载体观察ATRA及氯化钴(cobalt chloride,CoCl<,2>)模拟的缺氧环境诱导髓系细胞分化的过程中是否通过其启动子下调SATB1的表达.该研究的第一部分,首先克隆了2946bp长度的SATB1基因5非编码区片段,在此基础上构建了三个含不同长度SATB1启动子的萤光素酶报告载体pGL3-SP2946-luc,pGL3-SP1718-luc和pGL3-SP751-luc,瞬时转染Jurkat T,K562,U937和Hela细胞,通过测定萤光素酶的表达活性,观察到SATB1启动子在不同细胞内活性的差异,以pGL3-SP751-luc的启动子活性(48hr)为例,在Jurkat T和U-937细胞内的活性水平相对较高,在K-562细胞内的活性水平相对较低,而在Hela细胞中基本没有表达,pGL3-SP2946-luc和pGL3-SP1718-luc在四种细胞中的启动子活性同样存在差异.不同长度的SATB1启动子活性也存在差异,pGL3-SP751-luc在U937,Jurkat T和K562细胞中的活性均高于pGL3-SP2946-luc和pGL3-SP1718-luc,且与后两者在三种细胞中活性较低的情况不同,一直保持着比较高的活性水平,而三者在Hela细胞中都基本上没有表达,提示SATB1的核心启动子可能存在于-751至-9bp区域中.根据文献报道,在白血病的诱导分化治疗中,ATRA和CoCl<,2>可以诱导髓系细胞U937分化<[19-20]>,我们以前的研究结果显示,ATRA可以下调U937中SATB1的表达<[18]>.该研究的第二部分,首先利用半定量RT-PCR初步观察到CoCl<,2>可以在mRNA水平降低U-937细胞内SATB1的表达,在此基础上分别观察了ATRA和CoCl<,2>诱导的髓系细胞U-937分化对SATB1基因启动子萤光素酶报告载体pGL3-SP751-luc活性的影响,结果显示pGL3-SP751-luc的活性均出现下调,并呈现一定的剂量和时间依赖效应,提示ATRA和CoCl<,2>在诱导髓系细胞U937的分化中下调SATB1的表达,可能是通过其启动子产生下调效应.该研究初步探索了SATB1基因的启动子序列,SATB1启动子在不同细胞中活性的差异和髓系细胞分化对SATB1启动子活性的影响,为进一步详细研究SATB1的核心启动子,调控区中的顺式作用元件和与之发生相互作用的反式作用因子,及最终阐明SATB1基因的表达调控和其参与髓系细胞分化的具体机制打下了实验基础.