红掌(Anthurium andraeanum Lind.)的组织培养及基因枪介导的遗传转化

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红掌花叶兼美,是一种有较大发展前景和名副其实的名优花卉。其常规繁殖为分株扦插,繁殖率极低,而播种繁殖,要经人工授粉才可以收获种子,耗费人力,使传统的遗传育种也受到极大的限制,而利用组织培养结合基因工程技术是一种具有前景的育种方法。目前已报道的红掌再生体系往往存在继代周期偏长、繁殖系数偏低等缺点。红掌的转基因工作在国际上已有报道,但转化频率低、筛选周期长。针对上述问题,本研究采用红掌品种“亚历桑那”为实验材料,进行再生体系和基因枪介导的遗传转化体系的建立和优化,获得了以下主要结果: 建立了红掌简单高效的离体再生系统。研究表明,附加0.5mgl-1TDZ的1/2MS培养基对红掌叶片、叶柄愈伤组织的诱导效果最好,愈伤诱导率为95%以上,愈伤直径40d即可达到4mm大小。诱芽诱根培养基则以MS附加0.1mgl-1IBA为宜,芽和根的再生可一步完成,每块愈伤2个月即可平均长芽20个,长根12.1条。 在红掌的继代培养过程中获得了胚性愈伤,建立了固体和液体培养增殖体系。固体培养基以MS+0.1mgl-1IBA+0.4mgl-1TDZ为佳。液体培养基以1/2MS+1.0mgl-1IBA+0.5mgl-1TDZ+3%山梨醇+3%蔗糖为最佳,能快速稳定地获得大量的胚性愈伤用于遗传转化。在建立高效再生体系的基础上,研究了基因枪介导的红掌转化过程中不同条件对GUS基因瞬时表达的影响,初步建立了基因枪介导的红掌遗传转化体系。结果表明,真空度为28英寸汞柱,可裂解膜压力为1100psi,金粉浓度为500μg/枪,DNA为2μg/枪,靶距为6cm,胚性愈伤作为外植体时GUS瞬时表达效果最好,每枪轰击可得到1000多个蓝点。基因枪轰击后的愈伤转到选择培养基上,经过一年的反复筛选继代可获得抗性无菌苗。4株抗性植株经PCR检测均为阳性。
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