目的:第三代EGFR抑制剂奥希替尼（Osimertinib,AZD9291或TAGRISSO）获得性耐药的出现,是EGFR（Epidermal growth factor receptor,表皮生长因子受体）突变的NSCLC（Non-small cell lung cancer,非小细胞肺癌）临床治疗过程中面临的不可避免的巨大挑战。ACK1（Activated Cdc42-associated kinase 1,活化的Cdc42相关激酶1）是一种具有致癌作用的非受体酪氨酸激酶,而目前尚未有关于ACK1在调节EGFR突变的NSCLC细胞对奥希替尼的药物应答作用的相关研究。本课题中,我们主要研究ACK1抑制剂在EGFR突变NSCLC细胞中对奥希替尼抗肿瘤活性的影响,并探讨其延缓乃至克服奥希替尼获得性耐药的机制。方法:通过SRB实验和集落形成实验来检测不同药物处理对肺癌细胞生长抑制的影响。通过WB（Western blot,蛋白免疫印迹）实验和RT-qPCR（Real time quantitative PCR,实时荧光定量PCR）实验检测不同肺癌细胞中ACK1蛋白和mRNA表达水平的变化。利用siRNA和shRNA干扰技术,敲低ACK1在肺癌细胞中的表达水平,以进行后续集落形成实验探索ACK1表达水平对奥希替尼抗肿瘤活性的影响。通过流式细胞术检测不同药物处理对肺癌细胞凋亡的影响,并用 WB 实验检测 PARP、Caspase-3、Caspase-8 等凋亡蛋白及 EGFR、p-EGFR、ERK、p-ERK等相关通路蛋白的表达水平。通过集落形成实验,在肺癌细胞中检测ACK1抑制剂延迟奥希替尼获得性耐药的体外作用机制。通过敏感细胞株PC-9细胞建立裸鼠移植瘤模型,探索ACK1抑制剂延迟奥希替尼获得性耐药的体内作用机制。通过β-半乳糖苷酶染色检测ACK1抑制剂对细胞衰老的影响。结果:新型ACK1抑制剂（R）-9b与奥希替尼联用,可协同抑制EGFR突变NSCLC细胞的生长;而敲低ACK1基因的表达水平也有类似的效果。此外,（R）-9b与奥希替尼联用也可促进细胞的凋亡。在体外集落形成实验和体内裸鼠移植瘤模型的长期延迟耐药实验中,奥希替尼与（R）-9b联合使用均明显延缓了奥希替尼耐药的出现。此外,在奥希替尼获得性耐药的EGFR突变的NSCLC细胞系中,ACK1表达水平升高;而奥希替尼与（R）-9b联合使用,也有效抑制了奥希替尼耐药细胞在体内外的生长。在一些耐药的EGFR突变的NSCLC细胞中,（R）-9b与奥希替尼联合,除了诱导细胞凋亡,也诱导细胞衰老。结论:ACK1抑制剂（R）-9b可增强奥希替尼对EGFR突变NSCLC细胞的生长抑制作用。奥希替尼可上调EGFR突变NSCLC细胞中ACK1的mRNA及蛋白的表达水平。以ACK1 siRNA或ACK1 shRNA敲低ACK1的表达水平,可增强奥希替尼对EGFR突变NSCLC细胞的生长抑制作用。ACK1抑制剂（R）-9b与奥希替尼联用,在EGFR突变NSCLC细胞中可增强药物的诱导凋亡作用以及对EGFR/ERK信号通路的抑制作用。此外,ACK1抑制剂（R）-9b在体外细胞实验中以及体内裸鼠移植瘤模实验中,均可延缓乃至克服EGFR突变NSCLC细胞对奥希替尼的获得性耐药。在奥希替尼耐药的NSCLC细胞系中,ACK1表达水平显著升高。ACK1抑制剂（R）-9b与奥希替尼联合应用,可增强药物对奥希替尼耐药EGFR突变NSCLC细胞和肿瘤的生长抑制作用,并可促进细胞的衰老。因此,抑制ACK1可能是延缓乃至克服奥希替尼获得性耐药的潜在的和创新性的治疗策略。本研究作为新型ACK1小分子抑制剂（R）-9b在EGFR突变NSCLC中的一项临床前研究,其可用性为将来在临床上进一步验证奠定了基础。