亚甲基水杨酸杆菌肽(BMD)是杆菌肽的一种亚甲基水杨酸盐,对革兰氏阳性菌和产气荚膜梭菌有较好的生物活性作用。美国食品药品监督管理局(FDA)批准的BMD适应症包括提高日均增重和饲料报酬、提高蛋鸡产蛋量、防治鸡坏死性肠炎、治疗火鸡传染性肠炎、预防鹌鹑溃疡性肠炎和预防猪痢疾等。在欧盟,亚甲基水杨酸杆菌肽还被推荐用于治疗由产气荚膜梭菌引起的兔坏死性肠炎。本研究旨在建立兔可食用组织(肌肉、脂肪、肾脏和肝脏)中杆菌肽残留标志物的高效液相色谱质谱联用(HPLC-MS/MS)法,研究亚甲基水杨酸杆菌肽在兔可食性组织中的残留消除规律,进而为制定该药在兔体内的休药期提供依据。目前我国批准用于兔病防治的药物品种极少,开展亚甲基水杨酸杆菌肽可溶性粉在兔体内残留消除研究,对今后该产品的推广、临床合理用药具有重要的实际意义。1.建立兔可食性组织中杆菌肽残留标志物的HPLC-MS/MS检测方法兔可食性组织(肌肉、脂肪、肝脏和肾脏)使用三氯乙酸乙腈沉淀蛋白,0.5%三氟乙酸水提取,正己烷除脂,固相萃取柱净化,以0.1%甲酸水和乙腈(0-0.5 min 15%乙腈,7.5-8.0 min 85%乙腈,8.1-10.0 min 15%乙腈)为流动相进行梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式,多反应检测(MRM)模式。结果表明,杆菌肽在50～1000 ng/g添加浓度范围内,浓度与响应值之间线性关系良好,相关系数大于0.99,方法的检测限为30 ng/g,定量限为50 ng/g。杆菌肽平均添加回收率在74.7%～83.8%,批内批间变异系数均小于10%。本实验建立的兔可食性组织中杆菌肽残留量的HPLC-MS/MS检测方法适用于兔可食性组织中杆菌肽残留量的检测要求。2.亚甲基水杨酸杆菌肽可溶性粉在兔体内残留消除研究20只健康家兔(体重2±0.2 kg),将亚甲基水杨酸杆菌肽可溶性粉按6 mg/kg·bw/d(以杆菌肽计)的剂量混饮给药,连用10 d。分别于停药后第12 h(即零休药期)、1d、2d、3d和5 d时各屠宰四只兔,采集兔肌肉、脂肪、肝脏、肾脏等可食性组织,采用经验证的兔可食性组织中杆菌肽残留量高效液相色谱质谱联用方法,测定兔可食性组织中杆菌肽残留标示物的残留量。测定结果显示,停药后上述各时间点采集的兔可食性组织中亚甲基水杨酸杆菌肽残留量均低于检测限。鉴于此,亚甲基水杨酸杆菌肽可溶性粉按推荐给药方案防治兔坏死性肠炎时建议休药期可以定为0天。残留消除研究结果也证实,兔口服亚甲基水杨酸杆菌肽可溶性粉后几乎不吸收。