赤桉EcaICE1与EcaHOS1、EcaSIZ1的蛋白互作研究

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ICE1属于一种类似MYC的bHLH转录因子,是CBF上游的主要激活因子,可特异性结合到CBF3启动子的MYC作用元件以调控下游冷诱导基因的转录表达,从而提高植物的抗寒性。同时,HOS1和SIZ1介导的泛素化/苏素化-蛋白酶体途径能有效调节ICE1在不同环境条件下的表达。本研究以赤桉(Eucalyptus camaldulensis)组培苗为材料,在前期研究基础上,进一步扩增得到含有完整开放阅读框的EcaICE1、EcaHOS1和EcaSIZ1基因,用于后续EcaICE1的分子调控机理的探究。结果如下:1)采用荧光定量PCR对EcaICE1在赤桉不同组织中的表达量进行分析,发现EcaICE在根、茎、叶中均有表达,叶的表达量最高,茎其次,根最弱。2)通过烟草瞬时表达体系,借助激光共聚焦显微镜明确EcaICE1蛋白定位于细胞核上。3)双分子荧光互补技术(BiFC)结果显示在植物细胞核内EcaICE1与EcaHOS1、EcaSIZ1可发生互作。4)酵母双杂交实验再次验证EcaICE1与EcaHOS1、EcaSIZ1蛋白互作,同时确定了EcaICE1蛋白的转录自激活区域,并进一步证明EcaICE1蛋白N端126-185个氨基酸区域是其与EcaHOS1蛋白互作不可或缺的;EcaICE1蛋白C端361-557个氨基酸区域对其与EcaSIZ1蛋白的互作至关重要。上述结果为进一步研究EcaICE1在低温胁迫过程如何调控赤桉低温响应的分子机制打下基础。
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