论文部分内容阅读
本文以叙利亚仓鼠肾细胞(BHK-cell)为实验模型,分别研究了赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1和镰刀菌属三大类六种霉菌毒素对BHK细胞活力、DNA完整性、细胞SOD活性和MDA含量的影响,初步探讨霉菌毒素对BHK细胞产生影响的剂量和时效关系,及其可能的作用机理,为科学防控霉菌毒素污染提供参考依据。试验中,用噻唑兰法检测赭曲霉毒素A(OchratoxinA,OTA),黄曲霉毒素B1(AflatoxinBl,AFB1),镰刀菌属产生的玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)、脱氧雪腐镰刀菌醇(或呕吐毒素)(Deoxynivalenol,DON)、烟曲霉毒素(Fumonisin, Fu)T-2毒素对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA Ladder条带法检测这六种毒素对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活性的变化,用硫代巴比妥酸法测定细胞培养液中MDA的含量。赭曲霉毒素A对BHK细胞毒性及作用机制的研究中表明,赭曲霉毒素A对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用。染毒12 h后,2.5、5、10、20和40μg.mL-1OTA剂量组BHK细胞的活力均明显降低(P＜0.05),至染毒24 h,40μg.mL-1OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%。OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂量效应关系,与对照组相比,除2.5μg.mL-1剂量组外,其余各剂量组的彗尾DNA含量和拖尾率差异极显著(P<0.01),40μg.mL-1剂量组的细胞拖尾率高达对照组的80倍。40μg.mL-1OTA处理BHK细胞24 h后检测到特征性的凋亡梯形条带,对照组则未检测到。OTA作用于BHK细胞24 h后,各剂量组细胞内SOD活性显著降低(P<0.05),最高剂量组(40μg.mL-1)细胞内SOD活性降低至对照组的四分之一；细胞培养液中MDA含量则极显著升高(P<0.05),最高剂量组(40μg.mL-1)细胞培养液中MDA含量与对照组相比增高了500%。黄曲霉毒素B1对BHK细胞的毒性及作用机制的研究中AFB1作用于BHK细胞24h后,2.5、5、10、20和40μg.mL-1黄曲霉毒素Bl剂量组BHK细胞的活力均明显降低(P<0.05),40μg.mL-1AFB1染毒剂量组细胞活力下降达70%。AFB1对细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂量效应关系,与对照组相比,除2.5μg.mL-1剂量组外,其余各剂量组的细胞受损率和拖尾率差异极显著(P<0.01),40μg.mL-1剂量组的细胞拖尾率达对照组的70多倍。AFB1染毒组细胞内SOD活性显著降低(P<0.05),24 h后40μg.mL-1剂量组的SOD活性低于对照组的二分之一；细胞培养液中MDA含量则极显著升高(P<0.01),最高剂量组(40μg.mL-1)细胞液中的MDA含量与对照组相比均升高了近700%。实验中40μg.mL-1剂量组,在24 h检测到最为清晰的DNA Ladder条带。镰刀菌属的霉菌毒素主要包括玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌醇、烟曲霉毒素、T-2毒素。镰刀菌属的霉菌毒素对BHK细胞毒性及作用机制的研究中表明：四种镰刀菌霉菌属毒素均可引起BHK细胞活力显著降低(P<0.05),至染毒后24 h,40μg.mL-1 ZEA高剂量组细胞活力下降达95%。四种霉菌毒素对BHK细胞DNA的损伤作用也非常明显,如40μg.mL-1 Fu剂量组DNA拖尾率高达对照组的80多倍,差异极显著(P<0.01)。在毒素作用于BHK细胞24 h后,ZEA、DON、Fu的40μg.mL-1剂量组和T-2的1μg.mL-1剂量组均检测到DNA Ladder条带,24 h后最为明显,对照组均未检测到。ZEA、DON、Fu、T-2均可使BHK细胞内SOD活性显著降低(P<0.05),如DON作用于细胞24 h后,最高剂量组(40μg.mL-1)细胞内SOD活性降低至对照组的五分之一。ZEA、DON、Fu、T-2作用于BHK细胞后,细胞培养液中MDA含量则极显著升高(P<0.05),如T-2毒素1μg.mL-1剂量组细胞培养液中MDA含量与对照组相比升高了10倍。上述结果表明,赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1和镰刀菌属三大类霉菌毒素对BHK细胞均具有显著的毒性作用,这种作用不仅与细胞内过氧化物的大量生成和抗氧化酶活性下降有关,而且还与其造成细胞DNA损伤,引起细胞凋亡有关。