论文部分内容阅读
目的端粒酶（telomerase）是维持细胞端粒长度的逆转录酶，在肺癌细胞株及肺癌组织端粒酶活性表达明显增高。研究证实，hnRNP B1 （heterogeneous nuclear ribonucleoprotein B1）与端粒重复序列连接，在单链端粒重复或端粒酶RNA与其它双链DNA片断中起着连接分子的作用，hnRNP B1可能通过调节端粒酶活性参与肺癌细胞的增殖。本课题研究hnRNP B1特异性小分子干扰RNA（SiRNA）对肺癌A549细胞HnRNPB1基因表达、端粒酶RNA（human telomerase RNA，hTR）、端粒酶活性及细胞周期、凋亡的影响，为进一步探讨hnRNP B1与肺癌细胞端粒酶的关系提供实验依据。方法选用4组经hnRNP B1特异性SiRNA转染的人肺癌A549细胞作为实验组，同时设经空质粒转染的人肺癌A549细胞、人肺癌A549细胞两组作为对照组。用RT-PCR检测靶基因hnRNP B1 mRNA和hTR mRNA的表达，TRAP-ELISA检测细胞端粒酶活性，流式细胞仪检测细胞周期、凋亡。观察hnRNP B1特异性SiRNA对A549细胞hnRNP B1、hTR、端粒酶活性、细胞增殖和细胞凋亡的影响。结果（1）实验组细胞hnRNP B1 mRNA表达降低，抑制率分别为77.69％、74.37％、75.65％和83.04％。（2）实验组细胞hTR mRNA的表达降低，抑制率分别为79.45％、65.35％、60.00％、73.55％。（3）实验组细胞端粒酶活性分别为（0.3017±0.021）、（0.4833±0.017）、（0.5201±0.012）、（0.3305±0.042），与对照组（1.1597±0.6719）、（1.1556±0.2324）相比明显降低。（4）实验组细胞中，G1细胞增多，S期细胞减少，细胞周期阻滞在G1期。（5）实验组细胞凋亡率分别为（18.26±0.52）％、（21.10±1.54）％、（19.77±3.02）％、（31.13±3.07）％，与对照组（7.3±1.42）％、（9.3±1.45）％相比明显增高。（6）HnRNP B1 mRNA表达与hTR mRNA表达的相关系数r=0.986，成明显的正相关；hnRNP B1 mRNA表达与端粒酶活性的相关系数r=0.954，成明显的正相关。（7）HTR mRNA表达与端粒酶活性的相关系数r=0.971，成明显的正相关。（8）端粒酶活性与细胞凋亡率的相关系数r=-0.836，成明显的负相关。结论（1）HnRNP B1特异性SiRNA能抑制肺癌A549细胞HnRNP B1基因表达。（2）HnRNP B1特异性SiRNA能抑制肺癌A549细胞端粒酶RNA的表达，降低肺癌A549细胞端粒酶活性。（3）HnRNP B1特异性SiRNA能抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡。（4）hnRNP B1可通过调节端粒酶活性参与肺癌细胞的增殖与凋亡。