大肠杆菌yigP基因的结构及功能研究

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yigP基因存在于众多的微生物种属中,序列相对很保守。在大肠杆菌中,yigP基因(GeneID:948915)位于泛醌生物合成相关基因ubiE和ubiB之间。GeneBank数据库预测yigP可能是一个蛋白质编码基因,而关于yigP基因的结构和功能至今未见报道。本实验室前期对yigP的研究显示:yigP为大肠杆菌生长所必需的持家基因;其功能片段并非如预测的有606bp,其下游的部分片段足以发挥野生型yigP的功能;yigP基因有其独立的启动子。本课题在前人的研究基础上,本课题首先对yigP基因内部所有的ORF(大于35AA)进行单碱基缺失的移码突变,发现移码突变并不影响其功能的正常发挥,排除yigP为蛋白质编码基因的可能。位于质粒上的yigP基因可以回补染色体上缺陷的yigP基因,排除其为顺式调控原件的可能;这些间接的证明yigP为一个ncRNA编码基因。本课题用实时荧光定量PCR技术确定了yigP基因在对数生长期旺盛的表达,在对数生长末期表达量达到最高,进入平台期后,其表达量迅速的下降。本课题采用5’RACE技术确定了yigP基因的转录起点;并用3’RACE技术确定其存在两个转录终点,一个终止于yigP基因的末端,另一个延伸入下游基因ubiB内。本课题采用生物信息学技术在大肠杆菌全基因组水平上预测出yigP可能调节的29个靶基因。并用激发质粒/报告质粒双质粒鉴定系统对其进行一一的验证,发现yigP基因能够显著地增强ssuA、kdsD的表达。
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