地衣芽孢杆菌发酵豆粕的研究

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地衣芽孢杆菌D-1是安徽农业大学饲料科技研究所分离的一株饲用微生物,为了实现地衣芽孢杆菌D-1的工业化生产,对该菌株的液态产碱性蛋白酶培养条件、工业培养基配方和固态发酵豆粕的发酵条件进行了优化研究,并用该菌的固态发酵豆粕替代豆粕饲喂产蛋鸡,比较其对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响。试验1:地衣芽孢杆菌D-1产碱性蛋白酶培养条件的优化。为了对产碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌D-1的培养条件进行优化,利用10L发酵罐,采用正交设计L49(3)试验设计,对培养温度,pH值,搅拌转速和通气量4因素进行优化,得到地衣芽孢杆菌D-1发酵产碱性蛋白酶的最优培养条件为:培养温度37.0℃,pH值7.5,通气量4L/min,搅拌转速300r/min。利用最优条件组合进行验证实验表明,该培养条件下地衣芽孢杆菌D-1碱性蛋白酶的酶活为91.26U/mL。试验2:地衣芽孢杆菌D-1培养基的优化。为了优化地衣芽孢杆菌D-1菌株的培养基成分,以培养基各组分对菌体生长的影响作为考察指标,先采用单因素,确定最佳的碳源,氮源和无机盐源,后采用正交设计L9(33)试验设计,对地衣芽孢杆菌D-1的培养基主要成分进行分析和优化,得到地衣芽孢杆菌D-1优化的最佳培养基配方为:以2.5%麸皮作为碳源,以2%豆粕粉作为氮源,以0.06%KH2PO4作为无机盐源,250mL三角瓶装液量100mL,接种量5%,培养温度37℃,初始pH7.5,培养24h,活菌数最高,达到3.06×1012cfu/mL。试验3:地衣芽孢杆菌D-1发酵豆粕发酵条件的优化。为了优化地衣芽孢杆菌D-1发酵豆粕的发酵条件,以普通膨化豆粕为原料,采用L1(645)正交试验设计,用500mL三角瓶进行好氧固态发酵试验,研究接种量、料水比、发酵时间、装料量和发酵温度5因素对发酵豆粕中酸溶蛋白含量、胰蛋白酶抑制因子、碱性蛋白酶酶活、中性蛋白酶酶活及脂肪酶酶活的影响。结果表明,以酸溶蛋白增加量为目标的最优发酵条件为:接种量7%,料水比为1:1,发酵时间为58h,装料量为60g,发酵温度为39℃,发酵后酸溶蛋白含量(占风干样)为23.46%;以胰蛋白酶抑制因子降解效果为目标的最优发酵条件为:接种量为3%,料水比为1:0.9,发酵时间为48h,装料量为55g,发酵温度为33℃,发酵后胰蛋白酶抑制因子的含量为4.28mg/g;以碱性蛋白酶酶活为目标的最优发酵条件为:接种量7%,料水比为1:0.7,发酵时间为43h,装料量为55g,发酵温度为33℃,发酵后碱性蛋白酶酶活达到46.58U/g;以中性蛋白酶酶活为目标的最优发酵条件为:接种量9%,料水比为1:0.7,发酵时间为58h,装料量为55g,发酵温度为35℃,发酵后中性蛋白酶酶活达到31.58U/g;以脂肪酶酶活为目标的最优发酵条件为:接种量9%,料水比为1:0.7,发酵时间为48h,装料量为55g,发酵温度为33℃,发酵后脂肪酶酶活达到51.39mg/g。地衣芽孢杆菌D-1发酵豆粕不仅提高了酸溶蛋白的含量和消化酶的含量,而且能明显降解抗营养因子,从而改善豆粕的饲用品质。试验4:不同类型发酵豆粕饲喂产蛋鸡的应用研究。研究添加不同类型发酵豆粕对产蛋鸡生产性能、蛋品质及血液生化指标的影响。试验选取29周龄海兰蛋鸡324只,随机分成3组,每组设3个重复,每个重复36只鸡,分别饲喂基础日粮(对照)、高酸溶蛋白发酵豆粕等比例替代基础日粮中的2.5个百分点豆粕日粮(试验1组)、低胰蛋白酶抑制因子发酵豆粕等比例替代基础日粮中的2.5个百分点豆粕日粮(试验2组),试验期42d。结果表明,与对照组相比,试验1、2组产蛋率分别提高了3.08%和3.59%,差异均极显著(P<0.01),破软蛋率分别降低0.14%和0.25%,差异均显著(P<0.05),试验2组料蛋比降低了4.00%,差异显著(P<0.05),但对蛋重和蛋品质无显著影响(P>0.05);试验1、2组的IgA、IgM、IgG、碱性磷酸酶和总蛋白均有不同程度的提高,而尿素氮,血钙和血磷均有不同程度的降低;试验1组和试验2组较对照组每百千克产生的净效益分别为6.33元和10.31元。
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