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海藻糖因其所具有的生物学特性,在食品、医疗、饲用等方面得到了广泛的应用,需求量也日益增加。目前备受认可的海藻糖制备工艺是通过海藻糖合酶一步转化法生产海藻糖,然而海藻糖的获取以及安全性受到一定程度的限制,致使制备高纯度海藻糖成本较高。本论文通过对在NCBI基因库中提交的恶臭假单胞杆菌KT2440基因组进行BLAST比对,通过PCR扩增得到海藻糖合酶基因片段,将该片段构建到表达质粒pHT01上,利用麦芽糖启动子在枯草芽孢杆菌中进行诱导表达海藻糖合酶,以达到高效制备海藻糖的目的。（1）采用枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型调控元件来实现调控海藻糖合酶的表达,并通过改变碳代谢调节蛋白CcpA结合的麦芽糖启动子的cre序列,从而减弱葡萄糖代谢反馈抑制。通过引物PCR和重叠PCR技术成功将优化的麦芽糖启动子Pglv和海藻糖合酶基因tre S片段连接,并通过酶切和连接反应,成功构建到大肠-枯草芽孢杆菌的穿梭质粒pHT01上,得到重组质粒Pglv-pHT01-treS并电转化到B.subtilis WB800n中,在麦芽糖诱导条件下实现了海藻糖合酶在枯草芽孢杆菌中的表达,初步计算表达量高达2708.4 U/g。（2）为了防止麦芽糖诱导剂在对数后期诱导时被分泌到胞外的α-淀粉酶所水解成葡萄糖,降低麦芽糖启动子的启动转录效果。本试验通过单交叉互换方法敲除枯草芽孢杆菌WB800n的α-淀粉酶基因amyE,得到重组菌B.subtilis WB800n（ΔamyE）。然后将已经构建的质粒Pglv-pHT01-treS电转到B.subtilis WB800n（ΔamyE）感受态细胞中。然后通过HPLC液相分析重组菌B.subtilis WB800n(ΔamyE,Pglv-pHT01-treS)发酵验证结果,初步计算表达量提高到4228.5 U/g,提高了麦芽糖启动子的启动效率。（3）通过利用优化培养基对重组菌B.subtilis WB800n(ΔamyE,Pglv-pHT01-tre S)进行初步摇瓶发酵,并对溶菌酶破壁浓度和麦芽糖诱导浓度、诱导时机、诱导温度以及诱导时间做了优化探究。结果显示,当种子培养液放大培养时,菌体培养浓度培养至OD600为1.6时,然后添加至终浓度为40g/L的麦芽糖在37℃条件下持续诱导20h后收集菌体,添加终浓度为4mg/L的溶菌酶破碎1h后,所收获的海藻糖合酶酶活最高,最高达到9213.5U/g。初步实现了在枯草芽孢杆菌利用麦芽糖作为诱导剂并能够高效诱导表达得到了海藻糖合酶,得到了一种新型海藻糖制备方法。