目的:支气管哮喘(哮喘)是一种复杂的气道慢性炎症疾病,其主要病理特点是气道严重炎症反应,气道高反应性(airway hyperreactivity AHR)和气道重塑,发病过程中涉及多种炎症介质和免疫细胞对气道的作用。T淋巴细胞从辅助性T细胞(Th细胞)产生的细胞因子类型分为Th1、Th2型,而Th1/Th2失衡是哮喘最重要的发病机制。而对这些炎症细胞的活化和向气道迁移的过程中,趋化因子则起着重要作用。本实验意在讨论是否可以通过调节哮喘发病过程中趋化因子及趋化因子受体来平衡Th1、Th2反应,以达到治疗哮喘的目的。DNA疫苗是一种新型疫苗,具有安全、热稳定性好的优点,近年来已在哮喘的防治研究中取得了初步成果。Th1反应加强,Th2反应受到抑制,达到Th1/Th2免疫平衡状态并发挥对结核杆菌的抑制和杀灭作用。研究HSP70/CD80嵌合疫苗对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性以及TARC及其受体CCR4在肺组织中表达情况的影响,并探讨IL-4、CCR4、TARC在哮喘气道炎症中的作用及其对Th2细胞选择性调节的机制。哮喘现在已经成为危害人类健康的一大杀手,积极的治疗措施是应该有的态度。在现在哮喘预防和治疗的措施中,药物治疗的方法如激素的治疗存在着许多副作用。而传统的方法不能治病求本,不能从根本上解决问题,只能有限地改善症状。这些方法现都不能完全治疗哮喘。现如今的研究中对免疫疫苗的治疗方法已经有了初步的研究,并取得了一定的成果。哮喘的本质主要是免疫反应失去了平衡,从而亢进的一方分泌多种细胞因子使炎症介质和炎症细胞从外周血液迁移到发生炎症的部位,沉积在气道胶原纤维中发生一系列免疫反应。其中包括相应的趋化因子及趋化因子受体结合产生离子通道开放,离子外流引起细胞内外环境失调,导致气道分泌大量粘液,阻塞气道,患者出现呼吸困难,流鼻涕,心累等症状。所以应用免疫治疗的方法抑制亢进的一方反应,加强被抑制的一方,从而使得恢复免疫平衡状态,打断上诉一系列反应链,重新使身体机能复原。那么怎么样来使用免疫方法呢?免疫疫苗有很多的优点,它进入体内后可以通过抗原提成的作用使得TH1反应加强从而使得另一方收到抑制。没有副作用,因为其本质是增强自身的免疫力,使得免疫内环境达到平衡。现在研究的核酸DNA疫苗就是其中的一种。也是最热门的一类。本实验也是应用处理过的核酸DNA疫苗给小鼠注射,然后测量小鼠的各类指标如:IgE,TACR,IL-4,CCR4等相关的细胞因子及趋化因子,发现这些导致气道炎症反应和气道高反应性的炎症介质和因子都明显地下降,疫苗组小鼠出现的相应的哮喘症状也减轻,甚至是消失。这个实验证实了核酸疫苗的治疗方法是确实有效的。为临床研究奠定了基础。　　方法:鉴定HSP70/CD80嵌合DNA真核表达质粒,制备pVAX1质粒和HSP70/CD80嵌合质粒.对照组、哮喘组、pVAX1载体组和HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组。载体组和疫苗组分别腹腔注射pVAX1质粒和HSP70/CD80嵌合质粒,对照组与哮喘组注射相同剂量的生理盐水。眼球采血用ELISA方法检测外周血中IgE的含量。光镜下观察小鼠肺组织病理变化。免疫组织化学TARC抗原,定位其来源和在气道中的表达情况。Real-Time PCR检测肺组织IL-4和CCR4基因的表达水平。　　结果:　　1.小鼠气道反应性:予以不同浓度AchE刺激后,与对照组相比,哮喘组和载体组小鼠的气道反应性明显增高,而疫苗组有所降低。在AchE浓度达24mg/ml后,哮喘组、载体组小鼠显著高于对照组(P<0.050),而疫苗组小鼠低于哮喘组开始有明显差异,差异有统计学意义(P<0.050)。　　2.肺组织病理学改变:在小鼠肺 HE染色的病理切片中,哮喘组和载体组其支气管和血管周围甚至肺泡有明显的炎细胞浸润,支气管上皮有断裂、坏死,差异有统计学意义(P<0.050);而疫苗组能有效抑制气道和血管周围的炎症反应,差异有统计学意义(P<0.050);在小鼠肺切片PAS染色中,哮喘组和载体组气道上皮中杯状细胞增生肥大, PAS着色细胞明显增加,管腔中有大量黏液形成。　　3.血清中IgE浓度变化:与对照组比较,哮喘组和载体组小鼠血清中IgE含量明显升高(P<0.050);与哮喘组相比,疫苗组血清中IgE含量降低,差异具有统计学意义(P<0.050)。　　4.免疫组化检测肺组织TARC蛋白表达情况:免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞,哮喘组和载体组 TARC表达明显增多呈阳性或强阳性(P<0.050),与哮喘组比较,疫苗组 TARC表达呈阴性或弱阳性,差异学有统计意义(P<0.050)。　　5.Real-Time PCR法检测肺组织IL-4、CCR4的基因表达水平:与对照组比较,哮喘组和载体组IL-4、CCR4的基因表达增加(P<0.050);与哮喘组相比,　　6.相关性分析:小鼠免疫组化半定量TARC与肺组织炎细胞呈正相关(r=0.661,P<0.010);小鼠免疫组化半定量 TARC与肺组织 IL-4呈正相关(r=0.573,P<0.050);小鼠免疫组化半定量 TARC与肺组织CCR4呈正相关:(r=0.706,P<0.050);小鼠肺组织IL-4与CCR4相呈正相关:(r=0.536,P<0.050)。　　结论:　　1,为该质粒在动物体内的免疫学效应进一步研究奠定了基础。　　2.HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可减轻气道炎症反应,减少黏液分泌,降低气道阻力。　　3.本研究结果显示HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可通过抑制TARC在上皮细胞的表达,从而打断了IL-4,TARC正反馈效应,减弱Th2反应,为该疫苗作为新型免疫调节性疫苗提供新的理论依据。