诺西肽发酵工艺的放大实验

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诺西肽(Nosiheptide)是由活跃链霉菌(Streptomyces actuosus)产生的含硫多肽类抗生素,现已被开发成一种新型的非吸收型饲料添加剂。本文是在实验室研究的基础上,对诺西肽的生产工艺进行了放大实验,并对影响产品质量的因素进行了研究,以适应工业化生产的要求。首先,我们在10L种子罐上进行了接种量和种龄的研究,确定了最适的接种量为1%,最适的种龄为28小时;通过对50L发酵罐转种量和补料分批发酵工艺的研究,确定了10%的转种量为最佳转种量;确定了前期补水,后期补糖的发酵工艺,使诺西肽的发酵单位达到了2,049μg/mL,使之初步达到了工业化生产的水平。然后,我们在100L和15吨发酵罐上进行放大实验,并取得了很好的重复效果,发酵单位分别达到了2,194μg/mL和2,066μg/mL,具备了工业化发酵生产的能力。为了使生产能够顺利的进行,我们对生产菌种的稳定性进行了考察,并建立了相关的标准:斜面传代最多为三代;斜面在4℃冰箱保存时间为一个月;供生产用的种子液在4℃冰箱保存不超过三天。确定了实验室提取诺西肽的工艺:发酵后的菌体经水洗、乙醇萃取、717树脂脱色、浓缩、结晶得到粗品;粗品经水洗、正己烷洗涤、真空干燥得到诺西肽精品。并对诺西肽的稳定性进行了初步的研究,诺西肽以干粉形式保存最稳定:以溶液保存时,在可见光的照射下很快分解,故溶液应在低温避光的条件下保存。本论文还对管碟法测定诺西肽生物效价进行了研究:对二计量法的主要影响因素进行了考察,确定了效价测定的最佳操作方案。
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