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1993年Pasternack等人首次使用普通荧光光度计,提出了共振光散射(Resonance light scattering,RLS)技术,研究了卟啉分子的聚集,随后因其实验仪器简单,快速,方法灵敏度高而倍受关注,已成为超分子化学、物理化学和分析化学领域中强有力的分析技术。 本工作的主要内容是采用新兴的共振光散射技术建立了八种新的生物大分子与药物测定方法,并利用多种光谱与电镜等手段探讨了其作用机理。全文分为共振光散射技术在生物大分子与药物的分析研究两个部分。 第一部分,在生物大分子分析研究方面 在生物大分子分析研究方面,我们利用共振光散射法对构成生命必需的物质蛋白质和核酸进行了研究及分析应用。 第1章 邻硝基苯基荧光酮-月桂酰谷氨酸钠-蛋白质体系测定蛋白质的研究 本章研究结果表明,在邻硝基苯基荧光酮(DBONPF)-月桂酰谷氨酸钠(SLG)-蛋白质体系中,最佳试验条件下,各种蛋白质(BSA,HSA,γ-G egg albumin,Pep,Chy)的线性范围均在纳克级,检测限分别为3.4 ng mL-1,1.7 ng mL-1,4.1 ng mL-1,4.4 ng mL-1,6.2 ng mL-1,3.7 ng mL-1,用于测定人血清总蛋白质含量,结果满意。 第2章 β-环糊精-十二烷基磺酸钠-蛋白质体系测定蛋白质的研究 研究该体系的共振光散射光谱,结果表明,在pH 3.00的Britton-Robinson(BR)酸性介质中,β-环糊精、十二烷基磺酸钠与蛋白质自身的共振光散射信号都非常弱。但β-环糊精与蛋白质结合后,共振光散射信号得到增强,表面活性剂十二烷基磺酸钠加入能够极大的增强β-环糊精—蛋白质的共振光散射信号。据此,建立了一种测定蛋白质的高灵敏RRS新方法。用于人血清中蛋白质的测定,所得结果与考马斯亮蓝光度法一致。 第3章 诺氟沙星-ctDNA体系测定ctDNA的研究 在诺氟沙星-ctDNA体系中,试验发现ctDNA的加入能引起诺氟沙星自身较弱的共振光散射信号显著增加,据此,我们首次利用诺氟沙星做为共振光散射光谱探测定了脱氧核糖核酸。实验结果表明,在pH5.87的BR缓冲溶液中,波长405.5nm处出现最大共振光散射强度,ctDNA的线性响应范围分别为0.02-2.3μg mL-1,检测限分别为1.2ng mL-1。对三种合成样进行分析测定,结果满意。 第4章 诺氟沙星-yDNA体系测定yDNA的研究