梨极矮化突变体PuRGL2基因克隆及矮化相关基因的表达分析

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本试验以梨极矮化突变体为试材,用不同植物生长调节剂对植株进行处理,采集处理与对照叶片提取总RNA,利用PCR扩增及克隆,基因测序等技术克隆梨极矮化突变体编码DELLA蛋白基因PuRGL2,并进行半定量RT—PCR基因表达测定,推测梨极矮化突变体的类型,应用SRAP分子标记技术分析梨矮化突变体与延边地区栽培的小香水梨等梨品种的亲缘关系,推测其亲本。主要结果如下:外源喷施不同植物生长调节物质对梨极矮化突变体有一定的影响,经过赤霉素处理植株的在总生长量上与净生长量都与对照存在差异,其中250mg·L-1的赤霉素处理效果最显著,在处理后35天开始与对照出现显著差异。而梨极矮化突变体对生长素不敏感,喷施IAA并未促进节间伸长。初步推测梨极矮化突变体是GA缺陷型突变体。以梨极矮化突变体的cDNA为模板,成功克隆出一个具有典型DELLA蛋白结构的基因--PuRGL2,基因全长为1755bp,包含一个完整的编码584个氨基酸的ORF.PuRGL2与短枝型苹果的MdRGL2b基因和苹果的RGL2b基因的mRNA编码序列的同源性最高,达99%,与苹果RGL2a基因,短枝型苹果的MdRGL2a基因和湖北海棠的GAI2基因的mRNA编码序列的同源性也较高,达98%,并成功构建双元表达载体。通过半定量PCR测定GA20氧化酶,PuRGLl和PuRGL2基因表达量,结果表明在不同激素处理的植株体内GA20的表达量远远低于PuRGL1和PuRGL2的基因表达量,说明梨极矮化突变体的矮化可能与GA20基因有关。通过SRAP分子标记对延边地区存在的6个梨品种及2两个延边地区授粉梨品种进行分析,遗传距离及聚类树表明梨极矮化突变体与谢花甜的亲缘关系较近,与雪花梨等亲缘关系较远,对梨极矮化突变体亲本还需进一步研究。
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