超声放大肿瘤细胞生物标志物实验研究及作用机制探讨

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血清肿瘤标志物(Tumor marker, TM)检测在临床早期诊断卵巢癌方面已广泛应用,但由于早期肿瘤患者血液中含量极低,并可有多种非癌症因素(腹水、炎症、子宫内膜异位症等)引起TM的异常升高,早期肿瘤的标志物信号便被埋没在这些噪声信号中无法鉴别出来。因此本研究通过对超声生物效应的研究,初探超声致卵巢癌肿瘤标志物浓度增加的方法,进而分析影响TM增量释放的超声参数,建立在细胞、和小鼠移植瘤上超声放大的超声放大方法,探索该方法在卵巢癌早期诊断中的应用。本文研究内容主要有以下几方面:1、在超声频率F=1MHz的条件下(0.1 W/cm2~0.3 W/cm2,1 min~5 min),以电化学发光法检测细胞上清中的TM浓度(CA125、CA199),以TM增量和超声能量水平为主要考察指标,优化能使多种标志物增量达到最大的超声参数组合,建立超声能量和标志物增量之间的剂量-效应关系;并在建立卵巢癌异种移植肿瘤动物模型上验证超声放大卵巢癌肿瘤标志物方法的可行性。2、采用自制1 MHz脉冲超声发生器,并采用该设备施加超声于人卵巢癌上皮细胞(SKOV3),用台盼蓝染色、Edu细胞增殖实验、MTT增殖抑制实验、Transwell侵袭实验检测超声对卵巢癌细胞的死亡率、增殖能力和侵袭能力的影响;建立卵巢癌异种移植肿瘤动物模型,用免疫组化对瘤体进行E-钙粘蛋白、波形蛋白的染色,检测超声对肿瘤上皮间质转化的影响。3、本文采用的低功率超声(低于美国食药监规定)对离体卵巢癌细胞和活体卵巢癌移植瘤进行照射后,并未引起细胞和瘤体显著性的损伤,证实本文建立的超声放大TM新方法安全可靠。
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