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烟粉虱(Bemisia tabaci)起源于热带和亚热带,凭借其强大的适应能力,已在全球100多个国家和地区发生危害。烟粉虱通过特化的口器取食植物韧皮部汁液营养物质以维持自身生长发育,不但直接消耗寄主营养,还通过分泌蜜露引起煤污病,传播多种病毒造成寄主植物病毒病,给世界农业生产带来严重的经济损失。但目前烟粉虱的防治过度依赖单一化学药剂,导致其对多种药剂产生了抗药性,亟需利用新的防治途径或新型作用机制的药剂对烟粉虱进行可持续防治。烟粉虱和寄主植物间存在复杂的相互作用,对这种互作机制分子水平上的研究可以为烟粉虱防治带来新的思路,而效应因子在植物与烟粉虱互作中起到了关键作用;另外一些具有新型作用机制的杀虫剂如螺虫乙酯,也为烟粉虱防治带来新的手段。 本研究主要从以上两方面进行了探究。首先通过已有的数据基础对烟粉虱效应因子进行了预测,再结合序列分析、生物测定、瞬时表达、组织特异表达分析等对候选效应因子功能进行了初步探究;其次进行了全国五个地区田间种群烟粉虱若虫和卵对螺虫乙酯的田间抗药性监测。 1、Q烟粉虱候选效应因子的预测 本研究基于Q烟粉虱基因组和唾液腺转录组,通过两种路径预测了一系列的候选效应因子。其一是利用基因组对先前文献报道的烟粉虱预测分泌蛋白进行编码序列的校正,通过对信号肽跨膜区的预测,最终仅筛选保留了4条序列作为候选效应因子;其二是直接从唾液腺转录组的13651条unigenes入手,通过与基因组的比对,筛选出195条预测有信号肽且无跨膜区的候选效应因子,再结合效应因子的种间多态性以及在取食阶段表达上调的特性,保留了14个序列作为候选。因此本研究总共筛选保留了18个烟粉虱候选效应因子。 2、候选效应因子的克隆及功能初证 在预测工作完成后,基于编码序列,本研究对候选效应因子进行了基因克隆,并完成了部分候选效应因子的初步功能验证。在18个候选效应因子中,有16个候选效应因子被成功克隆并进行了序列验证,为了进行功能分析,对这16个候选分别进行了植物表达载体的构建,通过瞬时表达实验发现,6200、7722、11666均能引起烟草的防御反应但不能抑制由Bax触发的程序性坏死,而在番茄中过表达3号候选效应因子能降低烟粉虱产卵量,1号候选则能提高烟粉虱产卵量。通过定量分析发现,大部分的候选效应因子在头胸部表达量显著高于腹部。 3、烟粉虱田间种群若虫和卵对螺虫乙酯的抗药性监测 通过对北京、山东、山西、湖南、湖北五个地区的烟粉虱田间种群的抗药性监测发现,螺虫乙酯对烟粉虱若虫的防效要显著优于卵,2016年湖北地区若虫的LC50不到5mg/L,而卵的LC50则已超过250mg/L。五个地区中,湖北田间烟粉虱种群对螺虫乙酯有着最高水平的抗性。虽然螺虫乙酯对烟粉虱若虫仍然具有很好的防效,但我们不能忽略其过快的抗性水平增长速度,应采取与其它不同作用机制的药剂进行轮用混用的方法延缓抗性发展。