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近年来,随着水产养殖模式由粗放化向高密度集约化的快速转变,养殖环境急转直下,导致病害频发,使水产养殖业损失惨重。其中,由弧菌等引发的细菌性病害问题不可忽视,已成为制约水产养殖业可持续发展的一个关键性因素。养殖者长期对抗生素及其他化学类药物的过分依赖和不合理使用,致使抗生素治疗效果不佳甚至无效,并引发细菌耐药性问题。噬菌体因其具有替代抗生素治疗疾病的潜在可能而受到越来越多的关注。本研究以凡纳滨对虾养殖源弧菌作为宿主菌,分离鉴定其噬菌体,并对噬菌体进行生物学特性和基因组学的研究。1.宿主弧菌和噬菌体的分离与鉴定采集福建、广东和山东等地共66个凡纳滨对虾养殖场的100个虾样和183个养殖水样,运用分子生物学的方法对溶藻弧菌、哈维氏弧菌和副溶血弧菌进行了选择性分离,共分离196株黄色弧菌,90株绿色弧菌。以分离的286株对虾养殖源弧菌作为潜在宿主菌进行噬菌体的分离,结果显示,14株弧菌分离到19株噬菌体。运用形态特征观察、生理生化鉴定及16S rDNA分子鉴定、Biolog鉴定、HSP60基因等方法对14株宿主弧菌(V039、V067、V114、V130、V141、V149、V154、V170、V172、V173、V177、V208、V213、V214)进行种属鉴定。鉴定结果表明,除V149为哈维氏弧菌外,其它为溶藻弧菌。根据宿主鉴定结果,确定噬菌体ΦV039A、ΦV039B、ΦV039C、ΦV067A、ΦV067B、ΦV067C、ΦV067D、ΦV114、ΦV130、ΦV141、ΦV154、ΦV170、ΦV172、ΦV173、ΦV177、ΦV208、ΦV213、ΦV214为溶藻弧菌噬菌体,ΦV149则为哈维氏弧菌噬菌体。2.噬菌体的生物学特性研究根据电镜观察结果,19株噬菌体均属于有尾噬菌体目。其中,8株属于肌尾噬菌体科(ΦV039A、ΦV039B、ΦV039C、ΦV067D、ΦV114、ΦV170、ΦV172和ΦV208),9株属于短尾噬菌体科(ΦV067A、ΦV067B、ΦV067C、ΦV130、ΦV141、ΦV154、ΦV173、ΦV177和ΦV213),有2株属于长尾噬菌体科的(ΦV149和ΦV214)。噬菌体酶切结果显示,除ΦV154可能是ssDNA外,其他均为ds DNA。噬菌体对氯仿不敏感,无囊膜。噬菌体与宿主交叉裂解实验结果显示,噬菌体ФV130、ФV154、ФV170、ФV173和ФV177均能裂解4株以上的溶藻弧菌,属于宽谱噬菌体。最佳感染复数(MOI)实验结果显示,噬菌体ФV149的最佳感染复数为0.0001,产出率最高;其次是ΦV039A、ΦV039B、ΦV154、ΦV170、ΦV172、ΦV177、ΦV208的最佳MOI为0.01,产出率较高。噬菌体一步生长曲线结果表明,噬菌体ΦV067A、ΦV067B、ΦV170、ΦV177和ΦV213裂解能力强,裂解量在100以上。对宽谱噬菌体ΦV170热稳定性的研究发现,其热稳定性较好,对65℃及以上温度敏感。3.噬菌体基因组分析噬菌体ΦV039C基因组为环行dsDNA,全长43405 bp,GC含量为42.95%,共注释出77个阅读对话框(ORF)。噬菌体ΦV141基因组为线性dsDNA,全长43313bp,GC含量为48.17%,共注释出49个阅读对话框。噬菌体ΦV172基因组为线性dsDNA,全长22378bp,G+C含量为49.52%,共注释出39个ORFs。噬菌体ΦV208基因组为环形dsDNA,全长45521bp,G+C含量为43.2%,共注释出76个ORFs。对4个基因组进行了同源性分析。结果显示,噬菌体ΦV039C检索到的同源序列中,覆盖率最高仅为2%,这说明噬菌体ΦV039C可能是一株新发现的溶藻弧菌噬菌体。噬菌体ΦV141的基因组只检索到2条同源序列,覆盖率最高且仅为3%,这说明ΦV141很可能为一株新发现的溶藻弧菌裂解性噬菌体。噬菌体ΦV172基因组共检索到2条同源序列,与Vibrio vulnificus phage SSP002覆盖率高达97%,这说明ΦV172很可能为SSP002是同一株或亲缘关系很近的噬菌体。噬菌体ΦV208基因组检索到的同源序列中,覆盖率最高仅为3%,这说明ΦV208也极有可能为一株新发现的溶藻弧菌裂解性噬菌体。