甲基腺嘌呤第六位氮原子甲基化(N6-methyladenosine,m~6A)是真核信使RNA(m RNA)中最丰富的化学修饰,在许多生物过程中和病理过程起重要作用,也参与了多种肿瘤的发生进程调控。然而,其在膀胱癌(BCa)中的作用仍不明确。在此项工作中,我们发现甲基转移酶样3(METTL3),作为一种主要的RNA腺苷甲基转移酶,在人类BCa组织中表达显著上调。METTL3的敲低,显著抑制了BCa细胞的增殖、侵袭和存活以及体内成瘤性。另一方面,METTL3过表达可显著促进BCa细胞的生长和侵袭。通过转录组测序、m~6A测序和m~6A甲基化RNA免疫沉淀定量逆转录聚合酶链反应,我们首次揭示了METTL3介导的m~6A在BCa细胞中的修饰改变,并确定了AF4/FMR2家族成员4(AFF4),NF-κB通路中的两个关键成员(IKBKB和RELA)和MYC可以直接被METTL3介导的m~6A修饰调控。此外,我们还发现,AFF4可以与MYC基因的启动子结合,并促进其表达,提示了METTL3下游存在一个新的多层次调控网络。我们的研究结果METTL3介导的m6A修饰通过AFF4/NF-κB/MYC信号网络参与膀胱癌发生发展的调控机制,提供了对BCa临床诊断和治疗的新思路。