本研究用热处理+茎尖培养、热处理+茎尖培养+板蓝根、超低温+茎尖培养三种方法对苹果病毒进行了脱除，通过分析各方法的主要影响因子，确立了苹果脱毒的优化体系；建立了一种简便有效的苹果总RNA提取新方法；用RT-PCR对苹果潜隐性病毒进行了检测，并对RT-PCR体系进行了优化。结果如下： 1．用斑点酶联免疫吸附法检测了苹果褪绿叶斑病毒，该法操作简单，可有效地减轻单宁等物质对苹果褪绿叶斑病毒的钝化作用，提高检测的灵敏度。 2．研究了苹果总RNA提取方法，设计了一种新的RNA提取方法，用酸酚及140mM的NaCl来去除DNA，水不溶性PVP、β-巯基乙醇去除酚类物质，15％无水乙醇、1／5体积的3M KAC(pH4.8)来去除多糖，得到高质量的总RNA，该法操作简单，只需要3-4个小时。 3．用RT-PCR法对苹果潜隐性病毒ACLSV、ASGV、ASPV进行了检测。约0.02μg的苹果总RNA依然能扩增出特异性带。 4．用热处理+茎尖培养脱除病毒，转接后试管苗的培养时间以7—15天为宜；采用32℃8h和37℃8h交替处理60天的变温热处理法，试管苗热处理的成活率提高了11％，脱毒率提高了7.5％；茎尖分化培养基是影响茎尖分化的重要因素，不同的品种最佳培养基激素浓度配比不同，茎尖分化培养基BA与NAA配比应适当高于该品种继代培养基BA、NAA的配比，长富二号、金矮生适宜的分化培养基为MS+BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L，王林、美富、新乔纳金适宜的分化培养基为MS+BA2.0mg／L+NAA0.1mg／L。 5．在热处理+茎尖培养法的基础上，茎尖分化培养基中添加2.0g／L的板蓝根，可达到100％的脱毒率。但药害现象严重，茎尖的分化率只有16％，生长量大大降低。 6．用超低温+茎尖培养法脱除了苹果病毒，脱毒率可达70％。研究了3种玻璃化保护剂对成活率的影响，玻璃化保护剂PVS2、PVS3的效果最好，相差不大，其组成为PVS2：35％甘油+15％EG+35％蔗糖MS培养基；PVS3：40％甘油+10％EG+45％蔗糖+10％DMSO；PVS一步装载处理90min茎尖再生率最高，为45.5％；采用逐步装载，即先用装载液(15％甘油+15％蔗糖)处理20min，60％PVS3处理20min，PVS3处理80min，效果好于一步装载，茎尖再生率可达57.3％。