论文部分内容阅读
目的通过建立胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,观察苗药金乌健骨方对CIA大鼠关节炎指数(A1)、关节肿胀率、关节滑膜、软骨组织病理改变和滑膜组织激活蛋白1(AP-1)的两个亚单位c-Jun、c-Fos和核因子kappa B (NF-κB)信号通路NF-κB/65, NF-κB/P50IκBα蛋白表达的影响,探讨苗药金乌健骨方对类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法将健康清洁级Wistar大鼠70只随机分为空白对照组、模型对照组、苗药金乌健骨方高、中、低剂量治疗组、雷公藤多苷组(阳性对照组)及强的松组(阳性对照组),每组各10只,除空白对照组外,其余各组建立CIA大鼠模型,免疫后第14d开始分别灌胃治疗,连续治疗4周,各组大鼠自由摄食饮水。分别于给药前、给药后1周、2周、3周、4周观察大鼠关节肿胀率、计算AI。4周后处死大鼠,HE染色光镜下观察关节骨、软骨及滑膜的病理改变。分离关节滑膜,采用蛋白印迹法(western blot)检测滑膜组织核蛋白提取物AP-1的两个亚单位c-Jun、 c-Fos和NF-κB/P65. NF-KB/P50.蛋白表达。运用扫描仪扫描获得图像后,ImageJ2x软件测定其灰度值,对结果统计分析。结果1、成功复制了C1A大鼠模型。治疗前各造模组AI、关节肿胀率与空白对照组同一时间点比较(P<0.01)；经4周治疗后,各治疗组与模型组同一时间点比较(P<0.01)：金乌建骨方低剂量组Al、关节肿胀率：与模型对照组同一时间点比较(P<0.01),与强的松对照组同一时间点比较(P<0.05),与雷公藤对照组比较,差异无统计学意义。金乌健骨方对AI、关节肿胀率的下调作用与剂量有关。2、HE染色：空白对照组大鼠裸关节滑膜未见炎细胞浸润及血管翼的形成,软骨组织未见增生,软骨细胞排列整齐。CIA模型对照组滑膜组织可见大量淋巴细胞浸润、水肿、血管翼形成,软骨组织可见增生,软骨细胞呈簇集状,大量炎性细胞浸润,部分软骨钙化、坏死、侵蚀到骨质,甚至关节面骨质破坏。金乌健骨方低剂量组滑膜组织可见炎细胞浸润,滑膜组织增生水肿,软骨增生,软骨细胞排列紊乱、钙化、侵蚀骨质,关节面破坏。金乌健骨方中、高剂量治疗组和雷公藤多苷、强的松对照组可见少量新生血管形成及滑膜轻度增生,炎性细胞浸润减少,滑膜组织接近正常,软骨组织可见轻度增生及细胞排列紊乱,偶有侵蚀至骨皮质。3、c-Jun、 c-Fos:模型对照组与空白对照组的比较(P<0.01),模型对照组与各给药组比较(P<0.01或P<0.05)：金乌建骨方不同剂量组与强的松、雷公藤对照组比较均无统计学差异；金乌健骨方低、中、高剂量组对c-Jun、 c-Fos的抑制作用呈剂量依赖性,但不同剂量组之间无显著性差异。4、 NF-κB/P65、 NF-KB/P50:空白对照组与模型对照组比较(P<0.01),模型对照组与各治疗组比较(P<0.01或P<0.05),金乌建骨方不同剂量组与强的松、雷公藤比较无显著性差异。IκBα:空白对照组与模型对照组比较(P<0.01),模型对照组与各给药组比较(P<0.01或P<0.05)；金乌建骨方低剂量组与强的松对照组比较(P<0.05),金乌健骨方不同剂量组与雷公藤对照组比较,差异无统计意义。金乌健骨方不同剂量组对NF-κB/P50的抑制作用及对IκBα:上调作用呈剂量依赖性,不同剂量组之间无显著性差异。结论1、金乌健骨方可以降低CIA大鼠的关节炎指数(A1)和关节肿胀率,其作用呈剂量依赖性。2、通过病理观察提示金乌健骨方对C1A大鼠关节骨、软骨具有保护作用。3、金乌健骨方可以降低C1A大鼠滑膜组织c-Jun、 c-Fos、 NF-κB/P65. NF-κB/P50蛋白的表达,上调抑制蛋白IκBα:的表达。金乌健骨方对AP-1、NF-κB/P65、 NF-κB/P50的抑制作用及对IκBα:上调作用呈剂量依赖性。提示金乌健骨方对CIA大鼠AP-1、 NF-κB信号通路有抑制作用。