【摘 要】
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背景 雷帕霉素(Rapamycin;Sirolimus;西罗莫司)最初从一种土壤细菌中分离得到,是mTOR的特异性抑制剂,有较强的抑制免疫和抗真菌作用。由于雷帕霉素的这种作用只针对部分肿瘤
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背景 雷帕霉素(Rapamycin;Sirolimus;西罗莫司)最初从一种土壤细菌中分离得到,是mTOR的特异性抑制剂,有较强的抑制免疫和抗真菌作用。由于雷帕霉素的这种作用只针对部分肿瘤细胞,且必须依赖其他药物才能使肿瘤逆转,因而对mTOR复合物信号通路在体内发挥功能的具体机制及mTOR的底物存在诸多争议。 本实验首先采用MTT比色法,观察雷帕霉素对人宫颈癌Hela细胞增殖的抑制作用,并计算出48h时的半数抑制浓度IC50。进一步运用双向电泳的方法,比较雷帕霉素作用前后细胞蛋白表达的变化,从而筛选出与mTOR活性变化相关的特异性蛋白质。从而为进一步研究mTOR抑制剂雷帕霉素抑制肿瘤细胞生长的作用机制开辟一条新的途径。 实验方法 1.细胞培养及雷帕霉素半抑制浓度IC50的测定 以含10%FBS的RPMI1640培养基培养Hela细胞,按MTT法,酶标仪490nm处测得各组吸光度,计算雷帕霉素对Hela细胞的抑制率。以抑制率为纵坐标,药物浓度为横坐标,绘制48小时生长抑制曲线,运用改良的寇氏法计算出IC50。 2.以固相pH梯度等电聚焦(IEF)为第一向的双向电泳 分别以相同条件培养雷帕霉素处理过与未处理的Hela细胞,提取处理组与
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