两种离子液体与溶菌酶相互作用的研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:wangchaohui
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离子液体被认为是绿色,高技术含量的一种溶剂。离子液体本身的一些物理性质如下:蒸汽压为零,热稳定性较好不易变性。溶菌酶的分子量只有14.4kDa,有129个氨基酸残基,两个结构域,所以经常被用为模型蛋白来研究蛋白质的一些结构。本文中运用了傅里叶变换红外光谱,二维相关红外光谱,紫外光谱,荧光光谱等,从不同的侧面来研究离子液体与溶菌酶的相互作用。另外溶菌酶是一种酶,具有酶活,还可以从酶活的角度来研究蛋白质与离子液体的相互作用。在酶活实验中考察了pH,离子液体的种类,离子液体的浓度对溶菌酶活性的影响。最后选用实验条件选用pH=6.23和pH=5.02,两种水溶性的离子液体[Bmim][otf]和[Bmim][BF4],实验浓度为150mM。并运用于红外光谱中。在红外光谱中研究了三个反应体系(1)溶菌酶在不同pH值的重水缓冲溶液中的结构变化。(2)加入[Bmim][otf],在不同pH值下溶菌酶的二级结构变化(3)加入[Bmim][BF4],溶菌酶在不同pH重水缓冲溶液中的二阶结构的变化。分别运用傅里叶红外光谱,二阶导数光谱,差示光谱,二维红外相关光谱研究了溶菌酶与离子液体相互作用的氨基酸残基以及二级结构的变化,研究发现,在不同的pH值以及离子液体种类下,二级结构α螺旋与β折叠的变化顺序是不一样的,结合溶菌酶的活性研究发现这样的变化顺序跟溶菌酶的活性有一定的关联性,并且氨基酸残基Arg与无规则卷曲跟离子液体相互作用较强。在荧光光谱实验中研究了两个反应体系,(1)以[Bmim][otf]为淬灭剂的溶菌酶的荧光光谱。(2)以[Bmim][BF4]为淬灭剂的溶菌酶的荧光光谱。通过Stern-Volmer方程作图得出反应体系(1)离子液体[Bmim][otf]与溶菌酶为动态结合,反应体系(2)离子液体[Bmim][BF4]与溶菌酶的结合为静态—动态混合的结合方式。并计算出不同pH值和不同离子液体的热力学函数,根据不同的ΔH和ΔS组合判断出了不同种离子液体在不同种pH值下的相互作用力的形式和结合方式。并且研究了恒波长同步扫描荧光光谱,得出离子液体在溶菌酶缓冲溶液中Trp残基的影响要更大一些。
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