外泌体是一类可由绝大多数细胞分泌的微囊泡,携带有大量的核酸、蛋白质等信息。此外,外泌体与多种生理和病理功能相关,因此在疾病诊断和治疗过程中具有重要的应用价值。开发新型的外泌体分离材料对于研究外泌体及其生物医学功能具有重要的意义。本论文通过自由基聚合法合成了具有溶解-沉淀特性的pH响应聚合物材料,并研究了其对外泌体的分离富集性能。全文共分为四章:第一章:分为四小节,第一节是外泌体概述;第二节简述了外泌体分离方法研究近况;第三节简述了pH响应聚合物的研究进展;最后一节简述了本论文的主要研究内容。第二章:通过对氨基偶氮苯和丙烯酰氯反应合成了丙烯酰胺偶氮苯(AAAB)单体,以AAAB和甲基丙烯酸二甲氨基乙酯(DMAEMA)为单体,在偶氮二异丁腈(AIBN)引发下,合成了pH响应聚合物材料。利用傅里叶变换红外光谱仪、质谱仪、核磁共振波谱仪等技术证明了pH响应聚合物已成功制备。紫外浊度测试表明pH响应聚合物具有灵敏的pH响应特性,溶解-沉淀响应的ΔpH在1个pH单位左右,当pH由6.5增加到7.5时沉淀析出率在95%以上,且循环稳定性良好。采用牛血清白蛋白(BSA)溶液考察了pH响应聚合物的非特异性吸附,通过PBS清洗后可以基本消除非特异性吸附,从而可降低外泌体分离时高丰度杂蛋白质的干扰。第三章:将制备的pH响应聚合物用于乳腺癌细胞系MCF-7培养基中外泌体的分离,并通过Western Blot鉴定了外泌体的标志性蛋白质。实验结果表明,经pH响应聚合物分离后样品中外泌体标志性蛋白质含量显著提高。利用纳米颗粒示踪分析(NTA)计算了外泌体的回收率,其回收率可达87%。最后将该pH响应聚合物用于人血清样品中外泌体的分离,Western Blot实验结果表明pH响应聚合物在人血清外泌体的分离中同样取得了良好的效果。最后总结全文,本文制备了一种pH响应聚合物材料,该pH响应聚合物材料具有良好pH响应特性、良好的循环使用稳定性和低的非特异性吸附性能,可用于细胞培养基和血清中外泌体的有效分离和富集,具有广阔的应用前景。