低频低能量脉冲电磁场照射辅助化学疗法的研究以及对骨肉瘤细胞株转移的影响

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[目的]探讨在PEMF刺激作用下抗癌药物对血管内皮细胞的影响。[方法] 细胞在37℃,5%CO2, 95%空气,饱和湿度的条件下,利用添加了10% FBS 和1% Penicillin –Streptomycin 的RPMI1640 培养液培养于25cm2 flask 中,观察细胞生长状态,当细胞达到对数生长期,大约为90% confluent时,用0.25%胰蛋白酶进行消化处理成单细胞悬浊液,用trypan blue法计数后调整细胞浓度为1.5×104 cells /ml,然后将上述浓度的细胞200μl/well移种到96-well microplate中,并且按照培养液中是否含有VEGF(15ng/ml)并分成2大组培养,48小时后更换含有下列6个浓度0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5μg/ml Doxorubicin and Cisplatinum的培养液,然后PEMF200Hz, 100μsec, 50 Gauss刺激12小时,并继续培养24小时,将无PEMF刺激组设定为对照组,最后采用WST-1方法测定细胞的增殖结果。[结果]㈠,VEGF促进细胞增殖:HMEC-1细胞的增殖与VEGF的浓度存在依存性的关系。15ng/ml条件下表现出有意义的增殖。VEGF 15ng/ml用于以下的实验。㈡,抗癌剂无添加组:在没有抗癌剂条件下,无论是否添加了VEGF,在PEMF刺激下,HMEC-1细胞虽然稍有增殖的倾向,但是student T检验无差别。㈢,抗癌剂添加组:1,VEGF无添加组,在DOX和CDDP较低浓度下,即1.5μg/ml浓度以下时,随着抗癌剂浓度的增加,存活的HMEC-1细胞数逐渐减少,但是,PEMF(+)组和PEMF(-)(对照组)没有统计学上的差别。但是,当DOX和CDDP的浓度在超过1.5μg/ml以上时,存活的HMEC-1细胞数更加进一步的减少,尤其是PEMF刺激组存活的HMEC-1细胞数减少的更加明显,PEMF(+)组和PEMF(-)(对照组)出现统计学上差别(图6,7)。2,VEGF添加组,与无添加组不同的是,在DOX和CDDP较低浓度下,即从0.5μg/ml浓度开始,PEMF(+)组和PEMF(-)组出现统计学上差别,但是在抗癌剂的浓度超过2.0μg/ml时,统计学上的差别消失,我们分析可能是由于在这一组中,细胞对抗癌剂的敏感性增加,当在超过了一定浓度之后,统计学上的差别消失。[结论]PEMF刺激辅助化学疗法,不仅仅增强抗癌剂对肿瘤细胞的杀灭作用,同时,也对肿瘤内的血管内皮细胞产生强大的致死性,并且对生长活跃的血管内皮细胞更加有效,可能法对耐药的肿瘤和血管丰富的肿瘤可能使非常有效,安全的治疗方法。
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