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肺癌(lung cancer)是最常见的恶性肿瘤之一，是人类因癌症而死亡的首要原因，被认为是当今世界上对人类健康危害最大的恶性肿瘤。其中以非小细胞肺癌(non—small cell lung cancer, NSCLC)最多见，约占肺癌发病总数的80％，手术切除是早期NSCLC最有效的治疗方法，但50％—60％的Ⅰ—ⅢA期NSCLC患者尽管进行了完全的手术切除，仍会复发死亡。患者复发后的中位生存期大约是11.5月。
近年来，以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)为靶点的分子靶向治疗在NSCLC的治疗中发挥着越来越重要的作用。EGFR属于受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)家族，调控细胞的生长、分化、血管生成及凋亡抑制，其信号通路与恶性肿瘤的生长、侵袭及转移关系密切。
以吉非替尼(Gefitinib，商品名Iressa)和埃罗替宁(Erlotinib，商品名Tarceva)为代表的酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors，TKIs)针对性抑制结合EGFR，从而抑制酪氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)活性，使肿瘤缩小。在晚期NSCLC治疗中，Gefitinib的有效率约为20％，并有大量的研究显示Gefitinib对存在EGFR基因第19和21外显子突变的东方亚裔NSCLC患者的治疗效果非常好，且EGFR基因突变在腺癌、女性和非吸烟患者居多。
因此，进一步研究EGFR基因第19和21外显子突变的筛选办法、分子生物学特征及其与NSCLC临床病理特征和预后的关系，将有利于NSCLC的生物靶向治疗。
目的：
探讨NSCLC患者肺癌组织中EGFR基因突变、EGFR基因第19和21外显子突变以及EGFR蛋白表达的情况，及其与临床病理特征和预后的关系；分析EGFR基因突变、EGFR基因第19和21外显子突变与EGFR蛋白表达间的关系；建立一种快速、可靠的检测EGFR基因突变的新方法。
方法：
收集中山大学附属第二医院1998年9月至2008年8月间手术切除并经病理确诊的原发性非小细胞肺癌病例，连续抽取其中282例患者的石蜡包埋癌组织和收集临床病理资料、随访资料。组织学分类采用2004年《肺、胸膜、胸腺及心脏肿瘤病理学和遗传学》中WHO分类标准。对所有的病例分别用PCR—荧光探针法(PCR—fluorescence probing assay)和直接测序法(direct sequencing)检测肺癌组织中EGFR基因第19和21外显子突变；用免疫组织化学技术(immunohistochemistry, IHC)链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶连结法(streptavidin—peroxidase，S—P)检测肺癌组织中的EGFR蛋白表达；对病例资料和实验结果、生存分析应用SPSS11.5软件进行统计学分析，P<0.05为差异有统计学意义。
结论：
1.本研究NSCLC患者的EGFR基因突变率是42.6％，其第19外显子突变率为21.6％，第21外显子突变率为23.4％。EGFR基因第19外显子突变有11种不同的突变形式，其中delE746-S752insV+K754R+K757T、K739E+K757R+L760P、L760P三种类型为新发现的突变类型；第21外显子突变有9种不同的突变形式，其中G873R、L858R+E865K、G874D、D855N四种类型为新发现的突变类型。
2.EGFR基因及其第19外显子突变在腺癌、细支气管肺泡癌、腺鳞癌、女性及非吸烟患者中多见。
3.EGFR基因及其第19外显子突变与肿瘤的大小和分化程度均有密切关系；EGFR基因突变与患者年龄、淋巴结转移均有密切关系，但EGFR基因第19外显子突变与患者年龄、淋巴结转移均无关；EGFR基因及其第19外显子突变与临床TNM分期、远处转移均无关。EGFR基因及其第19外显子突变型组患者的预后均比野生型组好。
4.EGFR基因第21外显子突变在腺癌、细支气管肺泡癌、腺鳞癌中多见，与患者的年龄、肿瘤的大小和分化程度均有密切关系；而与性别、吸烟、临床TNM分期、淋巴结转移、远处转移和预后均无关。
5.NSCLC组织中的EGFR蛋白阳性表达率是45.4％。EGFR蛋白表达与患者的性别、年龄、吸烟、肿瘤的大小、组织学类型、分化程度、临床TNM分期、淋巴结转移、远处转移和预后均无关。
6.EGFR基因及其第19和21外显子突变均与EGFR蛋白表达无关。
7.PCR—荧光探针法是一种检测EGFR基因特定类型突变的快速、较可靠的方法。