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目的：把慢性心理应激与中医情志病联系起来,根据中医七情内伤,最先伤肝的病因理论,观测比较不同的慢性心理应激时间所导致的病位演变及证候变化规律,以及海马神经细胞、肝细胞等体细胞内自噬活动的变化情况。为下一步中医药抗应激损伤的动物实验研究摸索最佳造模时间,也为从细胞自噬角度阐释肝主疏泄的藏象理论提供实验依据。方法：根据旷场实验5分钟活动距离,大鼠随机分为空白组、造模10天组、造模20天组、造模30天组和造模40天组5组,六种造模方法(禁食、禁水、冰水游泳、夹尾、电击、束缚)随机安排在实验过程中,以旷场实验判断慢性心理应激模型的建立时间,酶联免疫法分析大鼠血清胃动素、胃泌素,慢性心理应激对大鼠海马CA1区神经细胞自噬体的影响,慢性心理应激对大鼠海马神经细胞、肝细胞自噬相关蛋白表达的影响。结果：1、慢性心理应激对大鼠空间记忆及学习能力和抑郁情绪的影响各组大鼠造模前旷场实验活动总路程无差异(P>0.05)。造模后,与空白组相比,5分钟活动总路程造模10天组距离缩短,但无差异(P>0.05)；造模20天组活动距离明显缩短,有差异(P<0.05)；造模30天组、40天组活动距离缩短,有明显差异(P<0.01)。前3分钟活动总路程,与空白组相比,造模10天组活动距离缩短,有差异(P<0.05)；造模20天组、造模30天组、40天组活动距离明显缩短,有显著差异(P<0.01)。2、慢性心理应激对大鼠胃肠激素的影响各组大鼠造模结束后取血,测定血清胃动素、胃泌素,与空白组相比,造模10天组血清胃动素下降,有差异(P<0.05)；造模20天组、30天组、40天组胃动素下降明显,有显著差异(P<0.01)。与空白组比较,造模10天组、20天组血清胃泌素下降,但无差异(P>0.05)；造模30天组、40天组下降明显,与空白组相比有差异(P<0.05)。而且随着造模时间的延长,大鼠血清胃肠激素呈逐步下降趋势。3、慢性心理应激对大鼠细胞自噬相关指标表达的影响3.1慢性心理应激对大鼠细胞自噬相关蛋白TSC2的影响各组大鼠造模结束后取材进行倒置显微镜观察,免疫组化染色后细胞质显示黄褐色,核呈现蓝色。空白组大鼠海马区显示,黄色区域分布少,造模10天组与空白组相比阳性表达率上升,但无差异(P>0.05)；造模20天组与空白组阳性表达率相比,上升,有差异(P<0.05)；空白组与造模30天组、40天组相比有显著差异(P<0.01)。空白组大鼠肝索清楚,细胞形态清晰,造模10天组与空白组相比阳性表达率上升,无差异(P>0.05)；造模20天组、30天组、40天组与空白组相比有显著差异(P<0.01)。3.2慢性心理应激对大鼠细胞自噬相关蛋白ULK1的影响海马神经细胞中ULK1的表达,造模10天组与空白组相比阳性表达率上升,但无差异(P>0.05),造模20天组与空白组阳性表达率相比,上升,有差异(P<0.05)；空白组与造模30天组、40天组相比有显著差异(P<0.01)。空白组大鼠肝索清楚,细胞形态清晰,造模10天组与空白组相比阳性表达率上升,但无差异(P>0.05);造模20天组与空白组阳性表达率相比,上升,有差异(P<0.05)：造模30天组、40天组与空白组阳性表达率相比有显著差异(P<0.01)。4、慢性心理应激对大鼠海马CA1区自噬体的影响各组大鼠造模结束后取材进行透射电子显微镜观察,比较海马细胞内的结构,空白组大鼠可见海马神经细胞胞壁完整,胞浆充盈,细胞形态清晰,无肿胀坏死,有少数自噬体可见；造模10天组海马神经细胞胞壁相对完整,胞浆充盈,肿胀坏死较少,细胞的结构形态清晰,自噬体数量少；造模20天组海马神经细胞胞壁较完整,胞浆相对充盈,肿胀坏死少,可见少量自噬体；造模30天组海马神经细胞胞壁不完整,胞浆少,肿胀坏死,双层膜包裹的自噬体数量较多,内含待降解物；造模40天组海马神经细胞胞壁破坏,肿胀坏死,可见大量双层膜包裹的自噬体或自噬溶酶体,胞质模糊不清,含有较多待降解物,核内染色体弥散不清。空白组大鼠海马CA1区的自噬体数目明显少于造模组,与造模10天组无差异(P>0.05),与造模20天组有差异(P<0.05),与造模30天组、40天组有明显差异(P<0.01),空白组自噬体数目最少,而造模40天组自噬体数目最多。结论：旷场实验有效的测定了慢性心理应激的造模时间,慢性心理应激影响大鼠的学习记忆能力并出现情绪抑郁,旷场实验中,应激时间越长,抑郁越严重,旷场活动距离越短。通过对旷场实验活动距离的测定及比较,将造模30天作为慢性心理应激最佳时间。慢性心理应激可以影响胃肠激素的释放,不同的造模时间下,胃肠激素水平不同。造模时间的延长,应激的加剧,胃肠激素水平下降。慢性心理应激影响了肝主疏泄功能的正常发挥,导致肝失疏泄,“见肝之病,知肝传脾”,肝病传脾,使脾胃受损,功能失调。因此,慢性心理应激随着时间的延长,证候可能发生变化,由肝郁气滞向肝郁脾虚转化。慢性心理应激影响海马CA1区细胞自噬,引起自噬的过度激活,造成该区细胞的损伤。随着造模时间的延长,海马区细胞自噬的程度加重,细胞破坏也加重。慢性心理应激影响到肝区及海马区的细胞自噬,使细胞结构发生变化。不同的造模时间下,细胞自噬表达不同。造模时间越长,细胞自噬程度越严重,细胞破坏也越严重。