急性髓系白血病M2CD33+/CD34+细胞表面核酸适体的筛选与克隆及序列分析

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背景与目的:白血病是一种起源于骨髓造血干细胞的恶性疾病,对白血病的准确诊断,有助于白血病的正确治疗并提高其治愈率,但目前仍然缺乏针对白血病细胞特异的诊断方法。指数富集配基的系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)技术是将化学和分子生物学相结合形成的一种新技术,应用此技术可以筛选出特异性结合靶细胞的适体(aptamer),并将其用于肿瘤的诊断。为此,本研究应用细胞-SELEX技术,从随机寡核苷酸文库中筛选与急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia AML)M2细胞高亲和力高特异性结合的aptamers,为白血病的分子诊断奠定基础。方法:应用免疫磁珠分选法,首先从AML-M2患者骨髓细胞中两次正性分选出CD33+/CD34+细胞,并用流式细胞术检测其纯度。然后,以AML-M2 CD33+/CD34+细胞为靶细胞,正常人CD33+/CD34+细胞为反筛选细胞,采用细胞-SELEX (cell-SELEX,c-SELEX)技术从体外单链DNA(single-stranded deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库中筛选出与AML-M2细胞特异结合的aptamers,并采用流式细胞术检测aptamers与AML-M2细胞的富集度。最后,将最终轮次筛选的产物进行扩增、克隆和测序,并分析其结构。结果:经过13轮次的筛选,ssDNA文库与AML-M2细胞的富集度从0.7%增加到52.9%,且第12轮时趋于平衡。对所获得的30个aptamers序列分析显示,大多数aptamers含有CCCCT、CTCTC和CTCAC 3个保守序列中的一种,但其中2个aptamers不含有这这些保守序列。二级结构分析获得3种不同类型的模拟二级结构。结论:利用细胞-SELEX技术,本研究成功筛选出与AML-M2 CD33+/CD34+细胞结合的aptamers,为白血病的分子诊断奠定了基础。
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