【摘 要】
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马蹄莲（Zantedeschia spp.）因其舌状佛焰苞的独特外观和丰富的色彩而具有较高观赏价值。现有的再生体系中缺乏胚性愈伤组织的再生使其稳定的遗传转化系统受到阻碍,严重影响了马蹄莲的育种工作。本试验主要探究了马蹄莲胚性愈伤组织的诱导、再生和遗传转化体系影响条件,主要的试验结果如下:（1）马蹄莲种子胚愈伤组织诱导条件的优化本研究以马蹄莲授粉后不同成熟度种子胚为材料,通过形态观察和愈伤诱导率的比
【基金项目】
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北京市农林科学院创新能力建设项目,项目名称:《白色马蹄莲种质资源的胚性再生及保存利用研究》,项目编号:KJCX202000111；
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马蹄莲（Zantedeschia spp.）因其舌状佛焰苞的独特外观和丰富的色彩而具有较高观赏价值。现有的再生体系中缺乏胚性愈伤组织的再生使其稳定的遗传转化系统受到阻碍,严重影响了马蹄莲的育种工作。本试验主要探究了马蹄莲胚性愈伤组织的诱导、再生和遗传转化体系影响条件,主要的试验结果如下:（1）马蹄莲种子胚愈伤组织诱导条件的优化本研究以马蹄莲授粉后不同成熟度种子胚为材料,通过形态观察和愈伤诱导率的比较对其愈伤组织诱导效果进行评价。结果表明,完全成熟的杂交种子胚更适合愈伤组织诱导。对诱导产生的愈伤组织进行石蜡切片显微观察,发现其细胞体积偏小,细胞核紧密,符合胚性愈伤组织的特点。采用正交试验设计的方法,设置了6-BA、NAA、基因型、新型多壁碳纳米管材料4个影响愈伤组织诱导的主要因素。结果表明,‘4d’和‘黎明’两个品种的杂交种子胚在MS培养基中添加6-BA 2 mg/L和NAA 0.1 mg/L时诱导愈伤组织效率最高为92%。（2）马蹄莲愈伤组织的再生设计正交试验对马蹄莲愈伤组织出芽和生根阶段的培养条件进行优化,分别设置6-BA、NAA和CNTs三个因素,每个因素设置三个水平,试验结果表明,出芽阶段的最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L+1 mg/L CNTs,出芽率为82%,影响出芽阶段的因素主次效应为NAA浓度＞6-BA浓度＞CNTs浓度。最佳生根培养基为MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.7 mg/L+2 mg/LCNTs,平均生根长度为3.5 cm,影响生根阶段的因素主次效应为6-BA＞CNTs＞NAA。（3）农杆菌介导的遗传转化体系建立本试验开发了一个基于农杆菌介导的遗传转化体系,为了直接验证转化效率,利用含有GUS基因的p CAMBIA1304载体的农杆菌菌液侵染马蹄莲愈伤组织,通过GUS染色直接观察转化效果,结果表明侵染的愈伤组织呈现蓝色,农杆菌介导的遗传转化真实有效。PCR检测表明载体成功导入马蹄莲愈伤组织中。
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